ジシクロペンチルシランジオールについて，細菌を用いる復帰変異試験を実施した．
検定菌として，Salmonella typhimuriam TA100，TA1535，TA98，TA1537 1)およびEscherichia coil WP2 uvrA 2)の5菌株を用い，用量設定試験で，WP2 uvrAのS9 mix添加試験以外では抗菌性を示す用量が認められたことから，本試験は用量範囲をS9 mix無添加試験では，Salmonella菌の4菌株では39.1〜1250 μg/plate，WP2 uvrAでは78.1〜2500 μg/plateとし，S9 mix添加試験ではTA1535とTA1537は78.1〜2500 μg/plate，TA100とTA98は156〜5000 μg/plate，WP2 uvrAは313〜5000 μg/plateとして実施した．ただし，TA100のS9 mix添加試験では，本試験IIで抗菌性のない用量が4用量に達しなかったため，78.1〜5000 μg/plateの範囲で本試験IIの再試験を行った．
その結果，2回の本試験で用いた5種類の検定菌のいずれの用量においても，陰性対照値の2倍以上となる復帰変異コロニー数の増加は認められなかった．
以上の結果から，ジシクロペンチルシランジオールは，用いた試験系において変異原性を有しないもの(陰性)と判定した．
ジシクロペンチルシランジオールは，ジメチルスルホキシド(DMSO，ロット番号:ACL5008，和光純薬工業(株))に溶解して最高用量の調製液を調製した後，同溶媒で所定の濃度に希釈して速やかに試験に用いた．
各検定菌ごとに用いた陽性対照物質は，当研究所で十分な蓄積データが得られている物質および用量とし，それぞれTable中に示した．
2-(2-フリル)-3-(5-ニトロ-2-フリル)アクリルアミド(AF2，和光純薬工業(株))
アジ化ナトリウム(SA，和光純薬工業(株))
9-アミノアクリジン(9AA, Sigma Chem. Co.)
2-アミノアントラセン(2AA，和光純薬工業(株))
AF2，9AAおよび2AAはDMSOに，SAは超純水に溶解したものを-20 ℃で凍結保存し，解凍後，速やかに試験に用いた．
S. typhimuriamの4菌株は1997年8月7日に，E. coil WP2 uvrA株は1997年4月9日に日本バイオアッセイ研究センターの松島泰次郎博士から分与された．
検定菌は-80 ℃で凍結保存したものを用い，各菌株の特性確認は，凍結保存菌の調製時に，アミノ酸要求性，UV感受性，膜変異(rfa)およびアンピシリン耐性因子pKM 101(プラスミド)の有無について調べ，特性が維持されていることを確認した．
試験に際して，ニュートリエントブロスNo. 2(Oxoid Ltd.)を入れたL字型試験管に解凍した種菌を一定量接種し，37 ℃で10時間往復振とう培養したものを検定菌液とした．分光光度計により660 nmの吸光度を測定し，検定菌液の増殖を確認した．
| 硫酸マグネシウム・7水和物 | 0.2 g |
| クエン酸・1水和物 | 2 g |
| リン酸水素二カリウム | 10 g |
| リン酸一アンモニウム | 1.92 g |
| 水酸化ナトリウム | 0.66 g |
| グルコース | 20 g |
| 大洋寒天(清水食品) | 15 g |
| 径90 mmのシャーレ1枚あたり30 mLを流して固めたものである． | |
| (A) | バクトアガー(Difco Lab.) | 0.6 w/v % |
| 塩化ナトリウム | 0.5 w/v % | |
| (B) | Salmonella typhimuriam用 | |
| L-ヒスチジン | 0.5 mmol/L | |
| D-ビオチン | 0.5 mmol/L | |
| (C) | Escherichia coil用 | |
| L-トリプトファン | 0.5 mmol/L |
| S9* | 0.1 mL |
| 塩化マグネシウム | 8 μmol |
| 塩化カリウム | 33 μmol |
| グルコース-6-リン酸 | 5 μmol |
| NADH | 4 μmol |
| NADPH | 4 μmol |
| ナトリウム-リン酸緩衝液(pH 7.4) | 100 μmol |
小試験管中に，被験物質調製液0.1 mL，リン酸緩衝液0.5 mL(S9 mix添加試験においてはS9 mix 0.5 mL)，検定菌液0.1 mLを混合し，37 ℃で20分間プレインキュベーションしたのち，約45 ℃に保温したトップアガー2 mLを加えて混和し，合成培地平板上に流して固めた．また，対照群として被験物質調製液の代わりに使用溶媒，または数種の陽性対照物質溶液を用いた．各検定菌ごとに用いた陽性対照物質の名称および用量は各Table中に示した．同時に実施した試験については，陰性および陽性対照群を共通とした．
培養は37 ℃で48時間行い，生じた復帰変異コロニー数をコロニーアナライザーまたは目視によって算定した．被験物質に由来する沈殿の有無は，肉眼により観察した．また，抗菌性の有無については，肉眼あるいは実体顕微鏡下で，寒天表面の菌叢の状態から判断した．用いた平板は用量設定試験においては，陰性および陽性対照群では3枚ずつ，各用量については1枚ずつとした．また，本試験においては，両対照群および各用量につき，3枚ずつを用い，それぞれの平均値と標準偏差を求めた．
用量設定試験は1回，本試験は2回実施し，結果の再現性を確認した．また，TA100のS9 mix添加試験については，本試験IIの再試験も実施した．
以上の結果から，本試験における最高用量は，S9 mix無添加試験では，Salmonella菌の4菌株では1250 μg/plate，WP2 uvrAでは2500 μg/plateとし，S9 mix添加試験ではTA1535とTA1537は2500 μg/plate，それ以外の検定菌は5000 μg/plateとした．
上記の最高用量に基づいて，公比2で5または6用量を設定して2回の本試験(本試験Iおよび本試験II)を実施した(Table 1, 2-1)．ただし，TA100のS9 mix添加試験では，本試験IIで抗菌性のない用量が4用量に達しなかったため，用量段階を7用量として本試験IIの再試験を行った(Table 2-2)．
その結果，すべての検定菌において，2回の試験とも陰性対照値の2倍以上となる復帰変異コロニー数の増加は認められなかった．
以上の結果に基づき，ジシクロペンチルシランジオールは，用いた試験系において変異原性を有しないもの(陰性)と判定した．
なおジシクロペンチルシランジオールは，当研究所で本試験と並行して実施したチャイニーズ・ハムスター培養細胞を用いる染色体異常試験では陰性であった4)．また，関連物質であるシランについては，復帰変異試験で陽性の結果が5)，メチルトリクロロシランについては，染色体異常試験で陰性の結果が，ジメチルジクロロシランとトリメチルクロロシランについては，染色体異常試験で陽性の結果が得られている6)．
| 1) | D. M. Maron and B. N. Ames, Mutation Research, 113, 173(1983). |
| 2) | M. H. L. Green, “Handbook of Mutagenicity Test Procedures,” eds. by B. J. Kilbey, M. Legator, W. Nichols, C. Ramel, Elsevier, Amsterdam, New York, Oxford, 1984, pp.161-187. |
| 3) | T. Matsushima, T. Sugimura, M. Nagao, T. Yahagi, A. Shirai, M. Sawamura, “Short-term Test Systems for Detecting Carcinogens,” eds. by K. H. Norpoth, R. C. Garner, Springer, Berlin, 1980, pp.273-285. |
| 4) | 山影康次，化学物質毒性試験報告，8, 1179(2001). |
| 5) | A. Araki, et al., Mutat. Res., 307, 355(1994). |
| 6) | A. Isquith, et al., Food Chem. Toxicol., 26, 255(1998). |
| 連絡先 | |||
| 試験責任者： | 澁谷 徹 | ||
| 試験担当者： | 原 巧，川上久美子，須井 哉，山本明子，三枝克彦，加藤初美 | ||
| (財)食品薬品安全センター秦野研究所 | |||
| 〒257-8523 秦野市落合729-5 | |||
| Tel 0463-82-4751 | Fax 0463-82-9627 | ||
| Correspondence | ||||
| Authors: | Tohru Shibuya(Study Director) Takumi Hara, Kumiko Kawakami, Hajime Sui, Akiko Yamamoto, Katsuhiko Saegusa, Hatsumi Kato | |||
| Hatano Research Institute, Food and Drug Safety Center | ||||
| 729-5 Ochiai Hadano-shi, Kanagawa, 257-8523, Japan | ||||
| Tel +81-463-82-4751 | Fax +81-463-82-9627 | |||