微生物を用いた3−ニトロベンゼナミンの変異原性試験

Mutagenicity Test of 3-Nitrobenzenamine with
the Salmonella/microsome Assay (Ames Test)

要約

3−ニトロベンゼナミンについてSalmonella typhimurium TA100、TA98、TA97、TA102を用いて遺伝子突然変異試験を行った。代謝活性化にはphenobarbitalおよび5, 6-benzoflavone処理したSprague-Dawleyラット肝由来のS9を用いた。最高濃度5 mg/plateまで試験した結果、代謝活性化の有無にかかわらず、3−ニトロベンゼナミンはTA100ならびにTA98に対して変異原性を示した。

緒言

S.typhimurium TA株を用いる変異原試験は最も汎用されている変異原性試験の一つであり、求電子的にDNAに作用する発癌物質の多くが、この試験で陽性結果を示すことが報告されている。既存化学物質毒性試験の一環として、3−ニトロベンゼナミンについて微生物を用いる遺伝子突然変異試験を行い、変異原性の有無を調べた。

方法

微生物を用いる遺伝子突然変異試験はS. typhimurium TA100（塩基置換型変異原検出用）、TA98、TA97（フレ−ムシフト型変異原検出用）、および TA102（架橋型、酸化型変異原検出用）の 4 菌株を用い、 37℃、20分間のプレインキュベーションを含むエームス法で行った1, 2）。Phenobarbital（PB）と5,6-benzoflavone（BF）で処理したラット肝より調製したS9はオリエンタル酵母より購入した。S9mix（0.5ml）中には、S9（50 μl）、G6P（2.5 μmol）、NADPH（2 μmol）、NADH（2 μmol）、MgCl2（4 μmol）、KCl（16.5 μmol）、リン酸ナトリウム（pH7.4, 40 μmol）が含まれている。

被験物質はdimethyl sulfoxide（DMSO）に溶解し、最高濃度は5 mg/plate、濃度段階は8段階として試験を行った。濃度に依存して誘発復帰変異コロニ−数が上昇し、しかもその数が自然復帰コロニ−数の2倍を越えた場合を陽性とした。陽性対照としては、−S9mixの条件下ではTA100、TA98にはAF-2、TA102にmitomycin C（MMC）、TA97にICR-191を、+S9mixの条件下では、いずれの株に対しても2-aminoanthracene（2AA）を用いた。

結果

微生物による突然変異試験の結果をTable１に示す。今回供試された被験物質既存化学物質毒性試験の一環として、3−ニトロベンゼナミンについて微生物を用いる遺伝子突然変異試験を行い、変異原性の有無を調べた。3−ニトロベンゼナミンはS9mixの有無にかかわらず、TA100、TA98に対して変異原性を示した。

考察

Shahinら3）は、3種のnitrobenzenamine異性体（o-, m-, p-）について、TA1535はじめ5種類の菌株を用いて試験を行い、m-nitro-anilineのみに変異原性が認められたと報告している。

3−ニトロベンゼナミンが陽性結果を示すことについてはいくつかの報告がある4-6）。3−ニトロベンゼナミンの変異原性がハムスターのS9存在下でflavin mononucleotide（ニトロ還元のため）を添加すると、著しく高まることが報告されている7）。また、Kinaeら8）は、沿岸海水中の主要な変異原として3−ニトロベンゼナミンの存在を指摘している。

文献

1)B.N. Ames, J. McCann and E. Yamasaki, Mutat. Res., 31, 347 (1975)
2)D. M. Maron and B. N. Ames, Mutat.Res., 113, 173 (1983)
3)M. M. Shahin , Int. J. Cosmet. Sci., 7, 277-289 (1985)
4)C. W. Chiu, L. H. Lee, C. Y. Wang and G. T. Bryan, Mutat. Res., 58, 11-12 (1978)
5)C. Z. Thompson, L. E. Hill, J. K. Epp and G. S. Probst, Environ.Mutagen., 5, 803-811 (1983)
6)M. Shimizu and E. Yano, Mutat. Res., 170, 11-22 (1986)
7)V. Dellarco and M. J. Prival, Environ. Mol. Mutagen., 13, 116-127 (1989)
8)N. Kinae, M. Yamashita, T. Watanabe, M. Takahashi, S. Yamamoto and I. Tomita, Water Sci. Technol., 17, 1435-1436 (1985)

連絡先：
試験責任者祖父尼俊雄
国立衛生試験所安全性生物試験研究センタ−
変異遺伝部
〒158東京都世田谷区上用賀1-18-1
Tel 03-3700-1141Fax 03-3700-2348

Correspondence:
Sofuni, Toshio
Division of Pathology,
Biological Safety Research Center,
National Institute of Health Sciences, Japan
1-18-1 Kamiyoga, Setagaya-ku, Tokyo, 158, Japan
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