2-クロロフェノールのラットを用いる単回経口投与毒性試験

Single Dose Oral Toxicity Test of 2-Chlorophenol in Rats

要約

2-クロロフェノールは，染料中間体，農薬原料である1)．本被験物質は刺激作用があり，皮膚からの吸収も大きく，皮膚に付着すると灼熱感を与える2)．今回，2-クロロフェノールを1群あたり雌雄各5匹のSD系ラットに1回経口投与し，その急性毒性を検討した．投与用量は雌雄ともに0，500，1000および2000 mg/kgとした．

その結果，2000 mg/kg群の雄3例と雌2例が死亡した．死亡動物では，投与日に自発運動の低下，間代性痙攣，腹臥位あるいは側臥位がみられ，剖検では脾臓の褪色が2000 mg/kg群の雌1例にみられた．

生存動物では，全被験物質投与群の雌雄で自発運動の低下，歩行異常，間代性痙攣，雄で腹臥位あるいは側臥位，また，2000 mg/kg群の雌雄で呼吸不整がみられた．これらの症状は，500および1000 mg/kg群では雄で投与後6時間，雌で投与後3時間，2000 mg/kg群では雄で第5日，雌で第4日に消失した．体重の低値が2000 mg/kg群の雌雄で第4日にみられたが，以降の体重増加は対照群と同様に推移した．剖検では，異常はみられなかった．

2-クロロフェノールを雌雄のラットに1回経口投与した結果，半数致死量(LD50値)は，雌雄ともに2000 mg/kg付近と推定した．

方法

1.　被験物質

イヌイ(株)(大阪)から提供された2-クロロフェノール(ロット番号OJL-15，純度99.49 %)を室温・密栓条件下で保存し使用した．被験物質の安定性は，被験物質提供者より保証する資料を入手し，確認した．被験物質はオリブ油(丸石製薬(株))に溶解調製し，投与液とした．投与液の調製は投与4日前に行い，投与に供するまで冷蔵保存した．投与液中の被験物質の冷蔵保存条件下での8日間の安定性は，投与前に0.4から200 mg/mLの範囲で確認した．また，各用量群の投与液を分析し，被験物質の濃度が設定濃度± 10 %以内であることを確認した．

2.　試験動物および動物飼育

日本チャールス・リバー(株)からCrj:CD(SD)IGSラット(SPF)を入手し，6日間検疫・馴化した．1群の動物数は雌雄各5匹とし，投与前日に，体重層別化無作為抽出法によって各群の体重がほぼ均一となるように群分けした．投与日の週齢は5週齢，体重範囲は雄が128〜139 g，雌が108〜120 gであった．

検疫・馴化期間を含む全飼育期間を通して，温度22 ± 2 ℃(目標値)，相対湿度55 ± 15 %(目標値)，換気約12回/時(オールフレッシュエアー供給)，照明12時間/日(7:00〜19:00)に自動調節した飼育室を使用した．動物は，実験動物用床敷(ベータチップ，日本チャールス・リバー(株))を敷いたポリカーボネート製ケージに群分け前はケージあたり5匹以下(同性)，群分け以降はケージあたり5匹(同性)収容し，飼育した．動物には，実験動物用固型飼料(MF，オリエンタル酵母工業(株))と，5 μmのフィルター濾過後，紫外線照射した水道水を自由に摂取させた．

3.　投与量および投与方法

予備試験として，被験物質を0，250，500，1000 mg/kgの用量で1群雌雄各3匹のSD系ラットに1回経口投与し，投与後7日間観察した．その結果，死亡例はみられなかった．しかし，投与日に1000 mg/kg群では重度の自発運動の低下がみられたことから，本試験では，1000 mg/kg群でも投与日に死亡する可能性が考えられた．このため，本試験の用量は2000 mg/kgを最高用量とし，以下公比2で1000および500 mg/kgの3用量を設定した．この他に溶媒のみを投与する対照群を設けた．投与前日より約18時間絶食させたラットに胃ゾンデを装着したシリンジを用いて1回強制経口投与し，投与後約3時間は飼料を与えなかった．投与液量は10 mL/kgとし，投与直前の体重に基づいて算出した．

4.　観察および検査方法

下記の項目を検査した．なお，日の表記は投与日を第1日とした．

1)　一般状態および体重

一般状態の観察は，投与日には15，30分，1，3および6時間の5回，以後は1日1回14日間にわたって行った．生存動物の体重は，投与直前，第4，8および15日に測定した．また，死亡例については発見時に測定した．

2)　病理学検査

観察終了後(第15日)に生存動物をチオペンタール・ナトリウムによる麻酔下で腹大動脈を切断・放血し，安楽死させた後剖検した．また，死亡動物については発見後速やかに剖検した．

結果

1.　死亡およびLD50値(Table 1)

2000 mg/kg群の雄3例と雌2例が投与後1時間から第2日までに死亡した．LD50値は，死亡状況から雌雄ともに2000 mg/kg付近と推定した．

2.　一般状態

死亡動物では，投与日に投与後15分から自発運動の低下，間代性痙攣，腹臥位あるいは側臥位がみられた．

生存動物では，投与日に投与後15分から症状が認められた．全被験物質投与群の雌雄で自発運動の低下，歩行異常，間代性痙攣，雄で腹臥位あるいは側臥位，2000 mg/kg群の雌雄で呼吸不整がみられた．これらの症状は，500および1000 mg/kg群では雄で投与後6時間，雌で投与後3時間までに消失した．2000 mg/kg群では第2日以降に雌雄で歩行異常，雄で自発運動の低下がみられ，雄では第5日，雌では第4日に症状が消失した．

3.　体重

生存動物では，体重の低値が2000 mg/kg群の雌雄で第4日にみられたが，以降の体重増加は対照群と同様に推移した．

4.　剖検所見

死亡動物で，脾臓の褪色が2000 mg/kg群の雌1例にみられた．

生存動物では，異常はみられなかった．

考察

2-クロロフェノールを雌雄のラットに0，500，1000および2000 mg/kgの用量を単回経口投与した結果，全被験物質投与群で自発運動の低下，間代性痙攣を主徴とする急性症状が発現し，2000 mg/kg群の雄3例と雌2例が死亡した．本被験物質のLD50値は，死亡状況から雌雄ともに2000 mg/kg付近と推定した．

文献

1)化学工業日報社編，“1994年度版 新化学インデックス，”化学工業日報社，東京，1993, p.198.
2)荒木峻，沼田眞，和田攻編，“環境科学事典，”東京化学同人，東京，1985, p.209.

連絡先
試験責任者：山下弘太郎
試験担当者：伊勢記代子，鈴木美江
(株)三菱化学安全科学研究所　鹿島研究所
〒314-0255　茨城県鹿島郡波崎町砂山14
Tel 0479-46-2871Fax 0479-46-2874

Correspondence
Authors:Kotaro Yamashita(Study director)
Kiyoko Ise, Yoshie Suzuki
Mitsubishi Chemical Safety Institute Ltd., Kashima Laboratory
14 Sunayama, Hasaki-machi, Kashima-gun, Ibaraki, 314-0255 Japan
Tel +81-479-46-2871Fax +81-479-46-2874