2-(4-モルホリニルジチオ)ベンゾチアゾールのラットを用いる単回経口投与毒性試験

Single Dose Oral Toxicity Test of 2-(4-Morpholinyldithio)benzothiazole in Rats

要約

2-(4-モルホリニルジチオ)ベンゾチアゾールの2000 mg/kgを雌雄ラットに一回経口投与し，その毒性について検討した．対照として媒体(0.5 %カルボキシメチルセルロースナトリウム水溶液)投与群を設けた．各群の使用動物数は雌雄各5例とした．

死亡例は，いずれの群の雌雄にも認められなかった．一般状態において，雌雄とも異常はみられなかった．体重では，2000 mg/kg群の雄で異常はみられなかったが，雌で投与後1日に低値がみられた．剖検では，雌雄とも異常はみられなかった．

以上の結果から，2-(4-モルホリニルジチオ)ベンゾチアゾールのLD50値は，雌雄とも2000 mg/kgを上回ると推定される．

方法

1．被験物質および媒体

2-(4-モルホリニルジチオ)ベンゾチアゾールは，融点(とけ始め)が131.9 ℃，比重が1.50〜1.52であり，水に0.006 g/100 mL(20.8 ℃)，メタノールに0.39 g/100 mL(23.2 ℃)，アセトンに1.93 g/100 mL(25.5 ℃)，トルエンに3.90 g/100 mL(21.0 ℃)溶解する淡黄白色ペレット状物質である[Lot No.202001，純度:98.4 %，大内新興化学工業(東京)]．入手後は，室温・遮光・気密条件下で保管した．投与後に残余被験物質を分析し，使用期間中安定であったことを確認した．

2-(4-モルホリニルジチオ)ベンゾチアゾールは，微粉砕後，0.5 %カルボキシメチルセルロースナトリウム水溶液で懸濁して調製した．被験物質の調製に際して，純度による換算を実施した．2〜200 mg/mLの調製液は，冷蔵・遮光条件下で7日間保存後，さらに室温・遮光条件下で24時間保存しても安定性に問題のないことが確認されているが，調製は用時とした．投与に使用した投与検体中の被験物質濃度を測定した結果，被験物質濃度および均一性に問題はなかった．

2．使用動物および飼育条件

4週齢のSprague-Dawley系雌雄ラット[Crj: CD (SD)IGS，SPF]を日本チャールス・リバーから購入した．入手した動物は，5日間の検疫期間およびその後2日間の馴化期間を設け，一般状態および体重推移に異常の認められなかった動物を群分けした．群分けは，投与日にコンピュータを用いて体重を層別に分けた後に，無作為抽出法により各群の平均体重および分散がほぼ等しくなるように行った．

動物は，室温20〜26 ℃，湿度40〜70 %，明暗各12時間(照明:午前6時〜午後6時)，換気回数12回/時に維持されている飼育室で飼育した．検疫・馴化期間中および群分け前の絶食時間中は，ステンレス製ケージを用いて1ケージ当たり5匹までの群飼育とし，群分け後はステンレス製ケージを用いて個別飼育した．飼料は，固型飼料(CRF-1，オリエンタル酵母工業)を自由に摂取させた．ただし，投与前日の夕刻から投与までの約18時間と投与後約6時間まで絶食した．飲料水は，水道水を自由に摂取させた．ただし，群分け時から投与後約6時間までは絶水した．

3．投与経路，投与方法および投与量

投与経路は，経口投与を選択した．投与に際しては，金属製経口胃ゾンデを取り付けたポリプロピレン製ディスポーザブル注射筒を用いて，強制経口投与した．投与液量は，投与直前に測定した体重を基準として10 mL/kgで算出した．投与回数は1回とした．投与日の週齢は5週齢であり，体重範囲は雄が107〜110 g，雌が93〜96 gであった．

2-(4-モルホリニルジチオ)ベンゾチアゾールのラット経口投与によるLD50値は10000 mg/kg，マウス経口投与によるLD50値は3000 mg/kgとの情報がある1)．そこで，当試験では，2000 mg/kg群を設定した．また，対照として媒体(0.5 %カルボキシメチルセルロースナトリウム水溶液)のみを同容量投与する群を設けた．

4．観察および検査項目

1)　観察期間

投与後14日間とした．

2)　一般状態

投与日は投与前および投与後6時間(投与直後〜投与後30分，投与後2，4および6時間)まで，投与翌日からは1日1回，一般状態および死亡の有無を観察した．

3)　体重測定

投与日および投与後1，3，7，10ならびに14日に測定した．

4)　剖検

動物は，投与後14日にジエチルエーテル麻酔下で腹大動脈から放血致死させた後に剖検した．

5．統計解析

雌雄とも，死亡例が認められなかったため，LD50値は推定した．

体重は，各群で平均値および標準偏差を算出した．その後，F検定による等分散性の検定を行い，等分散であったためStudentのt検定により行った．

結果および考察

1．死亡状況および一般状態

死亡例は，雌雄とも認められなかった．2-(4-モルホリニルジチオ)ベンゾチアゾールのLD50値は，雌雄とも2000 mg/kgを上回ると推定される．

一般状態において，いずれの群の雌雄とも異常はみられなかった．

2．体重

2000 mg/kg群の雄では，対照群と比べて各測定日の体重に有意差はみられなかった．2000 mg/kg群の雌では，投与後1日に体重の有意な低値がみられたが，その後は順調に推移した．

3．剖検

いずれの群の雌雄とも，異常はみられなかった．

以上のように，2-(4-モルホリニルジチオ)ベンゾチアゾールの雌雄ラットへの1回経口投与により，雌雄とも2000 mg/kg投与しても死亡例は認められず，一般状態および剖検所見に異常はみられなかった．なお，2000 mg/kg群の雌では，体重の一過性の低値がみられた．2-(4-モルホリニルジチオ)ベンゾチアゾールのLD50値は，雌雄とも2000 mg/kgを上回ると推定される．

文献

1)大内新興化学工業，未発表．

連絡先
試験責任者：古橋忠和
試験担当者：長瀬孝彦，内藤一嘉，吉島賢一
（株）日本バイオリサーチセンター羽島研究所
〒501-6251　岐阜県羽島市福寿町間島6-104
Tel 058-392-6222Fax 058-392-1284

Correspondence
Authors:Tadakazu Furuhashi(Study director)
Takahiko Nagase, Kazuyoshi Naito,
Ken-ichi Yoshijima
Nihon Bioresearch Inc.
6-104, Majima, Fukuju-cho, Hashima, Gifu, 501-6251, Japan
Tel +81-58-392-6222Fax +81-58-392-1284