1,2-ジシアノベンゼンのラットを用いる単回経口投与毒性試験

Single Dose Oral Toxicity Test of 1,2-Dicyanobenzene in Rats

要約

既存化学物質の安全性点検調査事業の一環として，1,2-ジシアノベンゼンについて雌雄のSD系ラットに単回経口投与した時の毒性を検討した．投与用量は0，30，60，120，240および480 mg/kgの6用量を設定した．

投与の結果，雌雄とも60 mg/kg以上の用量群で死亡例がみられた．死亡動物では痙攣および口周囲の汚れが60 mg/kg以上の群で認められ，240 mg/kg以上の群では上記に加え自発運動の低下，腹臥位，異常発声，挙尾およびチアノーゼが認められた．雄の60 mg/kg群では自発運動の低下，歩行異常のみが認められた．

生存動物では，雌の60 mg/kg群で投与後6時間に自発運動の低下が認められ，そのうち1例は第2日に自発運動の低下および不整呼吸が認められたが，それ以降は回復した．

生存動物の体重および全動物の剖検所見に異常は認められなかった．

1,2-ジシアノベンゼンの半数致死量(LD50値)は，雌雄とも85 mg/kg(95 %信頼限界50〜143 mg/kg)であった．

方法

1.　被験物質

1,2-ジシアノベンゼン(昭和電工(株)，東京，ロット番号CRL-981130，純度98.7 %)は，融点141 ℃，蒸気圧0.04 mbar(20 ℃)，水に0.56 g/Lおよび有機溶剤に可溶の黄色粉末で，フタロシアニン系染料，顔料の原料として用いられている1)．被験物質原体は室温・暗所に保存し，試験に供した．被験物質は試験期間中安定であったことを確認した．

2.　試験動物および飼育条件

日本チャールス・リバー(株)から入手した雌雄のSD系ラット(Crj:CD(SD)IGS, SPF)を，6日間検疫・馴化後，試験に供した．投与前日に体重層別化無作為抽出法により，1群につき雌雄各5匹に振り分けた．投与日の週齢は5週齢，体重範囲は雄が124〜145 g，雌が106〜120 gであった．

検疫・馴化期間を含めた全飼育期間を通して，温度22 ± 2 ℃，相対湿度55 ± 15 %，換気約12回/時，照明12時間/日(7:00-19:00)に自動調節した飼育室を使用した．

動物は，実験動物用床敷(ベータチップ:日本チャールス・リバー(株))を敷いたポリカーボネート製ケージに1ケージあたり5匹(同性)で収容し，飼育した．動物には，実験動物用固型飼料(MF:オリエンタル酵母工業(株))と，5 μmのフィルター濾過後，紫外線照射した水道水を自由に摂取させた．

3.　投与量および投与方法

投与経路は経口，投与回数は1回とした．投与前日から約17時間絶食させたラットにゾンデを用いて投与した．投与後約3時間は飼料を与えなかった．

投与用量は予備検討の結果(0，3，10，30および100 mg/kg，動物数:1用量あたり雌雄各2匹，300 mg/kg，動物数:雌雄各3匹)，300 mg/kgの用量で雌雄全例が投与後4時間までに死亡した．これらの結果から，本試験では480 mg/kgを最高用量とし，以下公比2で240，120，60および30 mg/kgの計5用量を設定した．この他に溶媒(0.5 % CMC-Na水溶液)のみを投与する対照群を設けた．投与液量は5 mL/kgとし，投与直前の体重に基づいて算出した．被験物質は溶媒(0.5 % CMC-Na[岩井化学薬品(株)]水溶液)に懸濁調製した．投与前に投与液中の被験物質の均一性および0.1 mg/mLと200 mg/mLの8日間の安定性について確認した．また，各用量群の投与液を分析し，被験物質の濃度が設定通りであることを確認した．

4.　観察および検査項目

1)　一般状態

投与日は10，30分，1，3および6時間の5回，以後は1日1回，14日間にわたって生死および一般状態を観察した．

2)　体重

体重は投与直前，第4，8および15日に測定した．

3)　病理検査

死亡動物は発見後速やかに剖検した．生存例については観察終了後にチオペンタールナトリウム麻酔下で放血し，安楽死させた後，剖検した．

4)　LD50値の算出

観察終了時の死亡率から，Probit法で算出した．

結果

1.　死亡動物(Table 1)

投与後30分から6時間までに，雌雄ともに，240および480 mg/kg群の全例，120 mg/kg群の4例，60 mg/kg群の1例が死亡した．

半数致死量(LD50値)は，雌雄とも85 mg/kg(95 %信頼限界50〜143 mg/kg)であった．

2.　一般状態

死亡動物では自発運動の低下，痙攣，および口周囲の汚れが雌雄の120，240および480 mg/kg群で認められ，この症状に加えて腹臥位，異常発声，挙尾およびチアノーゼが雌雄の240および480 mg/kg群で認められた．雄の60 mg/kg群では，自発運動の低下および歩行異常のみ認められた．雌の60 mg/kg群では，痙攣と口周囲の汚れのみ認められた．

生存動物では，雌の60 mg/kg群の4例で投与後6時間に自発運動の低下が認められ，そのうち1例は第2日に自発運動の低下および不整呼吸が認められたが，それ以降は回復した．

3.　体重

生存動物は対照群と同様に体重が推移した．

4.　剖検所見

異常は認められなかった．

考察

1,2-ジシアノベンゼンをラットに1回経口投与した．

その結果，投与日に雌雄とも480および240 mg/kg群で全例が死亡し，以下60 mg/kg群まで死亡個体が認められた．

死亡動物では，痙攣および口周囲の汚れが60 mg/kg以上の群で認められ，240および480 mg/kg以上の群では上記に加え自発運動の低下，腹臥位，異常発声，挙尾およびチアノーゼが認められた．雄の60 mg/kg群では自発運動の低下，歩行異常のみ認められた．生存動物では，雌の60 mg/kg群で投与後6時間に自発運動の低下が認められ，そのうち1例は第2日に自発運動の低下および不整呼吸が認められたが，それ以降は回復した．

以上の結果から，本被験物質の半数致死量(LD50値)は雌雄とも85 mg/kg(95 %信頼限界50〜143 mg/kg)と結論した．

文献

1)後藤稠，池田正之，原一郎編，“産業中毒便覧増補版，”医歯薬出版，東京，1984, pp.1169-1170.

連絡先
試験責任者：須藤雅人
試験担当者：伊藤重美，泉孔美子，鈴木美江，増田久美子
(株)三菱化学安全科学研究所　鹿島研究所
〒314-0255　茨城県鹿島郡波崎町砂山14
Tel 0479-46-2871Fax 0479-46-2874

Correspondence
Authors:Masato Sudo(Study director)
Shigemi Itoh, Kumiko Izumi, Yoshie Suzuki, Kumiko Masuda
Mitsubishi Chemical Safety Institute Ltd., Kashima Laboratory
14 Sunayama, Hasaki-machi, Kashima-gun, Ibaraki, 314-0255 Japan
Tel +81-479-46-2871Fax +81-479-46-2874