1,2,4-ベンゼントリカルボン酸トリオクチルのラットを用いる単回経口投与毒性試験

Single Dose Oral Toxicity Test of Trioctyl benzene-1,2,4-tricarboxylate in Rats

要約

1,2,4-ベンゼントリカルボン酸トリオクチルのSprague-Dawley系ラットを用いる急性毒性試験を実施した．雌雄各5匹に1,2,4-ベンゼントリカルボン酸トリオクチルの2000 mg/kgを単回経口投与し，観察第1日(投与日)から14日間観察を行い，観察第15日に剖検した．なお，対照として媒体(コーン油)投与群を設けた．

その結果，雌雄ともに死亡例はみられなかった．また，一般状態観察，体重推移および剖検では被験物質投与による影響は認められなかった．

以上の結果から，1,2,4-ベンゼントリカルボン酸トリオクチルのLD50値は，雌雄ともに2000 mg/kgを上回ると判断された．

方法

1.　被験物質

試験には，大日本インキ化学工業(株)(千葉)より提供された純度99 %以上の1,2,4-ベンゼントリカルボン酸トリオクチル(ロット番号:C-120，不純物:主に異性体)を用いた．被験物質は，使用時まで，容器を密栓し，室温で保管した．使用した被験物質は，提供元において，再度，品質試験を実施し，試験期間中の安定性を確認した．

媒体は，被験物質が水に溶けにくいため，コーン油を選択した．投与検体は，被験物質を秤量し，20 w/v%となるようにコーン油(製造番号:V9F1299，ナカライテスク(株))に溶解して調製した．1および25 w/v%の調製検体については，冷蔵，遮光条件下で8日間の安定性が確認されていることから，調製した検体は，冷蔵，遮光下で気密容器に入れて保管し，調製後2日に投与した．投与検体については，秦野研究所において被験物質の含量を測定し，含量が所定濃度の105 %であることを確認した．なお，投与検体は溶液であることから，均一性試験は実施しなかった．

2.　使用動物および飼育方法

試験には，4週齢のSprague-Dawley系(Crj:CD(SD)IGS，SPF)雌雄ラットを日本チャールス・リバー(株)厚木飼育センターから購入し，飼育環境への馴化と検疫を兼ねて入荷後7日間飼育した．群分けは，検疫終了時(投与前日)の測定体重を基に，体重別層化無作為抽出法により行い，雌雄とも1群5匹からなる2群に分けた．投与時の週齢は，雌雄ともに5週齢であった．

動物は，基準温度22〜25 ℃，基準湿度50〜65 %，換気回数約15回/時間，照明12時間(7時〜19時点灯)に制御された飼育室で，金属製金網床ケージに1匹ずつ収容し，固型飼料(CE-2，日本クレア(株))および水道水(秦野市水道局給水)を自由に摂取させて飼育した．

3.　投与量の設定および投与方法

投与量は，予備試験の結果に基づいて決定した．すなわち，被験物質の1000および2000 mg/kgを雌雄各3匹のラットに単回経口投与し，1週間の観察を行った．その結果，雌雄ともに被験物質投与によると判断される毒性症状はみられず，体重も順調に増加したことから，雌雄ともOECD化学物質試験法ガイドラインの定める限度試験を実施することとし，2000 mg/kgの1群および媒体(コーン油)投与群を設けた．

投与容量は体重1 kg当たり10 mLとし，動物を投与前約18時間絶食させた後，投与直前に測定した体重を基に投与液量を算出し，ラット用胃管を用いて強制的に単回経口投与した．給餌は投与後約3時間に行った．

4.　観察および検査

観察第1日(投与日)から14日間にわたって死亡の有無を確認し，各動物の一般状態を観察した．観察は投与日においては投与直後から1時間まで連続して行い，その後は投与後6時間まで約1時間間隔で実施した．観察第2日から15日までは毎日1回行った．

体重は全例について，投与直前，観察第2，4，8，11および15日に測定した．

剖検は，観察第15日に全例をペントバルビタール・ナトリウム麻酔下で放血屠殺して実施した．

5.　データ解析法

体重について，平均値と標準偏差を求め，Studentのt検定あるいはAspin-Welchのt検定を用いて検定した(有意水準:5 %)．

結果および考察

死亡例は雌雄ともにみられなかった．

一般状態では，観察第1日に粘液便の排泄あるいはそれに伴う肛門周囲の汚れが対照群および被験物質投与群の雌雄各2〜3例にみられたが，観察第2日以降に一般状態の異常は観察されなかった．粘液便の排泄は，対照群でも観察されていることから，媒体であるコーン油の影響と考えられる．

体重推移では，被験物質投与群は，雌雄とも対照群と同様の体重推移を示し，いずれの測定日とも有意差はみられなかった．

剖検では，雌雄全例の器官・組織に肉眼的異常所見は認められなかった．

以上の結果より，本試験条件下における1,2,4-ベンゼントリカルボン酸トリオクチルのLD50値は，雌雄ともに2000 mg/kgを上回ると判断された．

連絡先
試験責任者：太田　亮
試験担当者：勝村英夫，松本浩孝，丸茂秀樹，堀内伸二，三枝克彦，稲田浩子，安生孝子
(財)食品薬品安全センター秦野研究所
〒257-8523　神奈川県秦野市落合729-5
Tel 0463-82-4751Fax 0463-82-4751

Correspondence
Authors:Ryo Ohta(Study director)
Hideo Kastumura, Hirotaka Matsumoto, Hideki Marumo, Shinji Horiuchi, Katsuhiko Saegusa, Hiroko Inada, Takako Anjo
Hatano Research Institute, Food and Drug Safety Center
729-5 Ochiai, Hadano-shi, Kanagawa 257-8523, Japan
Tel +81-463-82-4751Fax +81-463-82-9627