2-tert-ブチルフェノールのラットを用いる単回経口投与毒性試験

Single Dose Oral Toxicity Test of 2-tert-Butylphenol in Rats

要約

2-tert-ブチルフェノールは，農薬，香料，樹脂を製造する際の原料である１)．今回，2-tert-ブチルフェノールを1群あたり雌雄各5匹のSD系ラットに1回経口投与し，その急性毒性を検討した．投与用量は雌雄ともに0，500，1000および2000 mg/kgとした．

その結果，1000 mg/kg群の雄1例および2000 mg/kg群の雄4例と雌全例が死亡した．死亡動物では，投与日に自発運動の低下，歩行失調，呼吸不整，腹臥位，側臥位および体温低下，第2日にはこの他にうずくまり，振戦，歩行異常，流涙がみられた．剖検では，腺胃のびらん/潰瘍が1000 mg/kg群の雄と2000 mg/kg群の雌雄，前胃の充血が2000 mg/kg群の雌雄，腹腔内の脂肪織の白色化および胸腔の脊椎周囲の出血巣が2000 mg/kg群の雄，空腸の黒色内容物が2000 mg/kg群の雌にみられた．病理組織学検査の結果，胃では前胃の重層扁平上皮の過形成と腺胃の胃腺上皮の変性・脱落が1000 mg/kg群の雄，前胃のびらん巣が2000 mg/kg群の雌雄，腺胃の壁細胞の空胞化が2000 mg/kg群の雄，胸部大動脈周囲脂肪組織の出血が2000 mg/kg群の雄に認められた．

生存動物では，投与日に500 mg/kg以上の投与群の雌雄で自発運動の低下，歩行失調，腹臥位，側臥位および体温低下がみられた．第2日以降には，1000 mg/kg群の雄で自発運動の低下および歩行異常が第4日まで，1000 mg/kg群の雌で歩行異常が第3日までみられた．体重の低値が1000および2000 mg/kg群の雄で第4日にみられた．剖検では，前胃の隆起巣が1000 mg/kg群の雄にみられ，病理組織学検査の結果，前胃の重層扁平上皮の過形成が認められた．

2-tert-ブチルフェノールを雌雄のラットに1回経口投与した結果，半数致死量(LD50値)は，雄では1231 mg/kg(95 %信頼限界 838〜1808 mg/kg)，雌では1414 mg/kgと結論した．

方法

1.　被験物質

大日本インキ化学工業(株)(東京)から提供された2-tert-ブチルフェノール(ロット番号C169，純度99.97 %)を室温，窒素封入条件下で保存し使用した．被験物質の安定性は，被験物質提供者より保証する資料を入手し，確認した．被験物質はオリブ油(丸石製薬(株))に溶解調製し，窒素封入した．投与液の調製は投与4日前に行い，投与に供するまで冷蔵保存した．投与液中の被験物質の冷蔵保存条件下での8日間の安定性は，投与前に0.4から200 mg/mLの範囲で確認した．また，各用量群の投与液を分析し，被験物質の濃度が設定濃度± 10 %以内であることを確認した．

2.　試験動物および動物飼育

日本チャールス・リバー(株)からCrj:CD(SD)IGSラット(SPF)を入手し，6日間検疫・馴化した．1群の動物数は雌雄各5匹とし，投与前日に，体重層別化無作為抽出法によって各群の体重がほぼ均一となるように群分けした．投与日の週齢は5週齢，体重範囲は雄が128〜147 g，雌が107〜121 gであった．

検疫・馴化期間を含む全飼育期間を通して，温度22 ± 2 ℃(目標値)，相対湿度55 ± 15 %(目標値)，換気約12回/時(オールフレッシュエアー供給)，照明12時間/日(7:00-19:00)に自動調節した飼育室を使用した．動物は，実験動物用床敷(ベータチップ，日本チャールス・リバー(株))を敷いたポリカーボネート製ケージに，群分け前はケージあたり5匹以下(同性)，群分け後はケージあたり5匹(同性)収容し，飼育した．動物には，実験動物用固型飼料(MF,オリエンタル酵母工業(株))と，5 μmのフィルター濾過後，紫外線照射した水道水を自由に摂取させた．

3.　投与量および投与方法

予備試験として，被験物質を0，500，1000および2000 mg/kgの用量で1群雌雄各3匹のSD系ラットに1回経口投与し，投与後7日間観察した．その結果，1000および2000 mg/kgの用量で雌全例が死亡した．1000および2000 mg/kgの用量の雄では投与日に重度の自発運動の低下がみられた．500 mg/kgの用量では重篤な変化はみられなかった．この結果から，本試験の用量は雌雄ともに2000 mg/kgを最高用量とし，以下公比2で1000および500 mg/kgの3用量を設定した．この他に溶媒のみを投与する対照群を設けた．投与前日より約18時間絶食させたラットに胃ゾンデを装着したシリンジを用いて1回強制経口投与し，投与後約3時間は飼料を与えなかった．投与液量は10 mL/kgとし，投与直前の体重に基づいて算出した．

4.　観察および検査方法

下記の項目を検査した．なお，日の表記は投与日を第1日とした．

1)　一般状態および体重

一般状態の観察は，投与日には15，30分，1，3および6時間の5回，以後は1日1回14日間にわたって行った．生存動物の体重は，投与直前，第4，8および15日に測定した．また，死亡動物については発見時に測定した．

2)　病理学検査

観察終了後(第15日)に生存動物をチオペンタール・ナトリウムによる麻酔下で腹大動脈を切断・放血し，安楽死させた後剖検した．また，死亡動物については発見後速やかに剖検した．剖検時に異常のみられた1000 mg/kg群の雄2例および2000 mg/kg群の雄1例，雌2例の胃，2000 mg/kg群の雌1例の十二指腸〜直腸，2000 mg/kg群の雄1例の腎臓，副腎および周囲の脂肪織と小腸，腸間膜および周囲の脂肪織，胸部脊椎および周囲の組織を採取し，10 %中性リン酸緩衝ホルマリン液で固定し，保存した．また，採材した器官のうち，全例の胃，2000 mg/kg群の雄1例の脂肪織および胸部組織については，常法に従ってヘマトキシリン・エオジン染色標本を作製し，鏡検した．

5.　半数致死量(LD50値)の算出

観察終了時の死亡率からVan der Waerden法で算出した．

結果

1.　死亡およびLD50値(Table 1)

1000 mg/kg群の雄1例および2000 mg/kg群の雄4例と雌全例が投与後3時間から第2日までに死亡した．LD50値は，雄では1231 mg/kg(95 %信頼限界 838〜1808 mg/kg)，雌では1414 mg/kgであった．

2.　一般状態

死亡動物では，投与日に投与後15分から症状が発現し，自発運動の低下，歩行失調，呼吸不整，腹臥位，側臥位および体温低下，第2日にはこの他にうずくまり，振戦，歩行異常，流涙がみられた．

生存動物では，投与日に500 mg/kg以上の投与群の雌雄で自発運動の低下，歩行失調，腹臥位，側臥位および体温低下がみられた．第2日以降には，1000 mg/kg群の雄で自発運動の低下および歩行異常が第4日まで，1000 mg/kg群の雌で歩行異常が第3日までみられた．

3.　体重

生存動物では，体重の低値が1000および2000 mg/kg群の雄で第4日にみられたが，以降の体重増加は対照群と同様に推移した．

4.　剖検所見

死亡動物で，腺胃のびらん/潰瘍が1000 mg/kg群の雄1例，2000 mg/kg群の雄1例と雌2例，前胃の充血が2000 mg/kg群の雌雄各1例，空腸の異常内容物(黒色)が2000 mg/kg群の雌1例，腹腔内の脂肪織の白色化および胸腔の脊椎周囲の出血巣が2000 mg/kg群の雄1例にみられた．

生存動物では，1000 mg/kg群の雄1例に前胃の隆起巣がみられた．

5.　病理組織学所見

死亡動物では，剖検時にびらん/潰瘍および前胃の充血のみられた胃，腹腔内の白色化した脂肪織および胸腔の脊椎周囲の出血巣の検査を行った．その結果，胃では，前胃の重層扁平上皮の過形成と腺胃の胃腺上皮の変性・脱落が1000 mg/kg群の雄1例に，前胃のびらん巣が2000 mg/kg群の雌雄各1例に，腺胃の壁細胞の空胞化が2000 mg/kg群の雄1例に認められた．また，胸部大動脈周囲脂肪組織の出血が2000 mg/kg群の雄1例でみられた．なお，腹腔内脂肪織の白色化に対応する組織学的変化はみられなかった．

生存動物では，剖検時に前胃の隆起巣がみられた1000 mg/kg群の雄1例の胃を検査した結果，重層扁平上皮の過形成がみられた．

考察

2-tert-ブチルフェノールを雌雄のラットに0，500，1000および2000 mg/kgの用量を1回経口投与した結果，1000 mg/kg群の雄1例および2000 mg/kg群の雄4例と雌全例が死亡した．本被験物質のLD50値は，雄では1231 mg/kg(95 %信頼限界 838〜1808 mg/kg)，雌では1414 mg/kgと結論した．

文献

1)化学工業日報社編，“1994年度版 新化学インデックス，”化学工業日報社，東京，1993, p.549.

連絡先
試験責任者：山下弘太郎
試験担当者：五十嵐佳代，土谷　稔，鈴木美江
(株)三菱化学安全科学研究所　鹿島研究所
〒314-0255　茨城県鹿島郡波崎町砂山14
Tel 0479-46-2871Fax 0479-46-2874

Correspondence
Authors:Kotaro Yamashita(Study director)
Kayo Igarashi, Minoru Tsuchitani, Yoshie Suzuki
Kashima Laboratory, Mitsubishi Chemical Safety Institute Ltd.
14 Sunayama, Hasaki-machi, Kashima-gun, Ibaraki, 314-0255, Japan.
Tel +81-479-46-2871Fax +81-479-46-2874