フタルイミドのラットを用いる単回経口投与毒性試験
Single Dose Oral Toxicity Test of Phthalimide in Rats
要約
フタルイミドの2000 mg/kgを5週齢のCrj:CD(SD)IGS系ラットの雌雄に単回経口投与し，その毒性を検討した．
死亡例は雌雄のいずれにも認められず，LD50値は2000 mg/kgを超えると推定された．一般状態，体重推移，剖検および病理組織学検査に影響は認められなかった．
方法
1. 被験物質
フタルイミドは，白色〜うすい黄色の結晶性粉末であり，遮光気密容器に入れ，冷蔵保存した．本試験では三星化学工業(株)(東京)製造のロット番号7255(純度99.9 %)を使用した．なお，試験終了後の残余被験物質を製造業者が分析し，試験期間中の被験物質の安定性が確認された．
投与には，被験物質を200 mg/mLの濃度になるように1 w/v%カルメロースナトリウム水溶液に用時懸濁したものを用いた．なお，200 mg/mL調製液は規定の濃度の±5 %以内であり，均一であることが確認された．
2. 試験動物および飼育条件
4週齢のCrj:CD(SD)IGS系SPFラットの雌雄を日本チャールス・リバー(株)より購入し，8日間の馴化飼育を行い，異常がなく順調な発育を示した動物を試験に用いた．動物は，温度22〜24℃，湿度45〜61 %，換気回数10〜15回/時および照明時間12時間(午前8時から午後8時まで点灯)に制御されたバリアシステムの飼育室で，ブラケット式金属製金網床ケージに群分け前は5匹以内，群分け後は1匹を収容して飼育した．飼料はγ線照射固型飼料(CRF-1，オリエンタル酵母工業(株))，飲料水は水道水(札幌市)をそれぞれ自由に摂取させた．
3. 投与量の設定および群分け
本試験の投与量設定のための予備試験を，フタルイミドの2000 mg/kg群ならびに媒体である1 w/v%カルメロースナトリウム水溶液を投与する対照群の計2群を設定し，1群当たり雌雄各5匹のラットを用いて実施した．その結果，投与後7日間の観察において死亡例は認められず，一般状態，体重推移および剖検にも異常は認められなかった．
したがって，本試験では限界試験として，フタルイミドの2000 mg/kgを投与する群と，媒体である1 w/v%カルメロースナトリウム水溶液を投与する対照群を設け，各群とも雌雄各5匹のラットを割り当てた．
群分けは，投与前日に各群の体重が均一になるように体重層別化無作為抽出法により行った．
4. 投与方法
投与は，動物を約16〜18時間絶食させた後，胃ゾンデを用いて強制的に胃内に1回行った．投与容量は，体重1 kg当たり10 mLとして投与日に測定した体重に基づいて算出した．投与時の週齢は雌雄ともに5週齢で，その平均体重(体重範囲)は雄で130.2 g(127〜135 g)，雌で107.8 g(105〜111 g)であった．
5. 観察，測定および検査項目
全例について，一般状態を投与日は投与後6時間までは頻繁に，投与後1日以降は1日1回の頻度で投与後14日まで観察した．また，体重を投与日，投与後1，3，5，7，10および14日に測定した．投与後14日に，全例について体外表部を観察した後，エーテル麻酔下で放血致死させ，剖検した．このうち，対照群および2000 mg/kg群の雌雄各2例の肝臓，腎臓，脾臓，心臓，肺，脳(大脳・小脳)，胃(前胃・腺胃・幽門部)，十二指腸，空腸，回腸，盲腸，結腸，直腸および卵巣を10 %中性緩衝ホルマリン液で，精巣および精巣上体をブアン液でそれぞれ固定した後，常法に従いパラフィン切片を作製し，ヘマトキシリン・エオジン染色標本を作製して，病理組織学検査を行った．
6. 統計解析
体重，体重増加量および体重増加率について，Bartlettの検定法により等分散性を検定し，その結果，等分散の場合は一元配置分散分析法で解析し，有意な場合，Dunnettの検定法(各試料の大きさが違う場合は有効反復数を用いた)で対照群とフタルイミド投与群との比較を行った．一方，不等分散を示した場合はKruskal-Wallis法を用いて解析し，有意な場合，Mann-WhitneyのU-検定法で対照群とフタルイミド投与群との比較を行った．
対照群との検定に際しては，有意水準を5 %とした．
結果
1. 死亡状況およびLD50値
雌雄ともに，いずれの群においても死亡は認められず，LD50値は2000 mg/kg以上と推定された．
2. 一般状態
いずれの例にも観察期間中を通して，異常は認められなかった．
3. 体重
雄の2000 mg/kg群に，対照群と比較して有意差は認められず，体重推移に異常は認められなかった．
4. 剖検および病理組織学検査
フタルイミド投与による異常は認められなかった．
考察
フタルイミドの2000 mg/kgを5週齢のCrj:CD(SD)IGS系ラットの雌雄に単回経口投与し，その毒性を検討した．
死亡例は2000 mg/kg群の雌雄のいずれにも認められず，LD50値は2000 mg/kgを超えると推察された．一般状態，体重推移，剖検および病理組織学検査で異常はみられなかった．
| 連絡先 |
| 試験責任者： | 吉村浩幸 |
| 試験担当者： | 吉田文子，皆川英俊，古川正敏，山本美代子 |
| (株)化合物安全性研究所 |
| 〒004-0839 北海道札幌市清田区真栄363番24号 |
| Tel 011-885-5031 | Fax 011-885-5313 | |
| Correspondence |
| Authors: | Hiroyuki Yoshimura (Study director)
Ayako Yoshida, Hidetoshi Minagawa, Masatoshihi Furukawa, Miyoko Yamamoto |
| Safety Research Institute for Chemical Compounds Co., Ltd. |
| 363-24 Shin-ei, Kiyota-ku, Sapporo, Hokkaido, 004-0839, Japan |
| Tel +81-11-885-5031 | Fax +81-11-885-5313 | |