試験は，指標菌株としてSalmonella typhimurium TA100，TA1535，TA98，TA1537およびEscherichia coli WP2 uvrAを用い，S9 mix 非存在(直接法)および存在(代謝活性化法)下でプレインキュベーション法により行った．
用量は，菌の生育阻害が認められた用量を最高用量とし，直接法ではいずれの菌株とも15.6〜500 μg/plateの範囲(公比2)，また，代謝活性化法ではS. typhimurium については15.6〜500 μg/plate，E. coliにおいては31.3〜1000 μg/plateの範囲(公比2)で設定した．
試験を2回行った結果，代謝活性化の有無にかかわらず，全ての菌株において復帰変異コロニー数の増加は認められなかった．菌の生育阻害については直接法および代謝活性化法ともにいずれの菌株とも最高用量において認められた．
以上の成績から，四臭化エタンの細菌に対する遺伝子突然変異誘発性は陰性と判定した．
試験に際して，各凍結菌株を解凍後，その25 μLをニュートリエントブロス(Bacto nutrient broth dehydrated，Difco Laboratories)液体培地15 mLに接種し，37 ℃で12時間振盪培養した．培養後の懸濁菌液は濁度を測定し，濁度と生菌数の換算式より1 mLあたり1 × 109以上の生菌数が得られていることを確認し，試験菌液とした．
各菌株の遺伝的特性検査は，凍結保存菌の調製時並びに各実験ごとに行い，本試験に用いた菌株が規定の特性を保持していることを確認した．
実験終了後，残余被験物質を分析した結果，安定性に問題はなかった．
| AF-2 | : | 2-(2-フリル)-3-(5-ニトロ-2-フリル)アクリルアミド(和光純薬工業(株)) |
| 2-AA | : | 2-アミノアントラセン(和光純薬工業(株)) |
| NaN3 | : | アジ化ナトリウム(和光純薬工業(株)) |
| 9-AA | : | 9-アミノアクリジン(Aldrich Chemical Co.) |
AF-2および2-AAはDMSO(和光純薬工業(株))に，NaN3および9-AAは蒸留水((株)大塚製薬工場)に溶解した．
| 硫酸マグネシウム・七水塩 | 0.2 g |
| クエン酸・一水塩 | 2 g |
| リン酸水素二カリウム | 10 g |
| リン酸一アンモニウム | 1.92 g |
| 水酸化ナトリウム | 0.66 g |
| グルコース | 20 g |
| 寒天(OXOID Agar No. 1) | 15 g |
但し，明確な用量依存性が認められない場合においても，陽性値を示す試験結果に再現性が認められれば陽性と判定することとした．
試験を2回行った結果(Tables 1〜4)，直接法および代謝活性化法のいずれの場合も，供試した全ての菌株において復帰変異コロニー数は，溶媒対照値の2倍を越えることはなかった．菌の生育阻害については，直接法では500 μg/plateで，また，代謝活性化法においてはS. typhimuriumでは500 μg/plate，E. coliでは1000 μg/ plateで認められた．
以上の成績から，本実験条件下では，四臭化エタンの遺伝子突然変異誘発性は陰性と判定した．
四臭化エタンの変異原性については，S. typhimurium を用いた復帰突然変異試験において，S9 mix存在下のTA98，TA100，TA97およびTA104並びにS9 mix非存在下のTA97で陽性と報告されている3)が，今回の試験においてはTA98およびTA100ともに陽性値は確認できなかった．この結果の相違の一因として，陽性と報告されている試験では，Arocolor1254によって酵素誘導されたS9 mixを用いており，今回試験に用いた薬物代謝酵素との分子種の違いが考えられる．その他の報告では，大腸菌を用いたDNA修復試験で陽性4, 5)と報告されている．
| 1) | D. M.Maron, B. N. Ames, Mutation Research, 113，173(1983). |
| 2) | M. H. L. Green, "Handbook of Mutagenicity Test Procedures," 1, Vol. 3, eds. by B. J. Kilbey, M. Legator, W. Nichols, C. Ramel, Elsevier, Amsterdam, New York, Oxford, 1984, pp. 161-187.. |
| 3) | K.Strobel, T. Grummt, Toxicoligical and Environmental Chemistry, 15, 101(1987). |
| 4) | H. S. Rosenkranz, B. Gutter, W. T. Speck, Mutation Research, 41, 61(1976). |
| 5) | H. Brem, A. B. Stein, H. S. Rosenkranz, Cancer Research, 34, 2576(1974). |
| 連絡先 | |||
| 試験責任者： | 野田 篤 | ||
| 試験担当者： | 野田 篤，昆 尚美 | ||
| (財)畜産生物科学安全研究所 | |||
| 〒229-1132 神奈川県相模原市橋本台3-7-11 | |||
| Tel 042-762-2775 | Fax 042-762-7979 | ||
| Correspondence | ||||
| Authors: | Atsushi Noda(Study director) Naomi Kon | |||
| Research Institute for Animal Science in Biochemistry and Toxicology 3-7-11 | ||||
| Hashimotodai, Sagamihara-shi, kanagawa, 229-1132 Japan | ||||
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