4-(1-メチルエテニル)フェノールのラットを用いる単回経口投与毒性試験

Single Dose Oral Toxicity Test of 4-(1-Methylethenyl)phenol in Rats

要約

4-(1-メチルエテニル)フェノールの0，150，300，600および1200 mg/kgを1群につき雌雄各5匹のCrj:CD(SD)IGSラットに単回経口投与してその毒性を検討し，以下の成績を得た．

投与後6時間から3日までに，雌雄の600 mg/kg投与群で各3例，1200 mg/kg投与群で全例が死亡した．

一般状態では，雌雄とも600 mg/kg以上の投与群で投与後1時間から呼吸緩徐，体温低下，横臥，自発運動の減少，外尿道口周囲被毛の汚れ等の毒性徴候が認められた．

体重では，雌雄の600 mg/kg投与群の生存例で体重増加抑制が認められた．

剖検では，雌の600および1200 mg/kg投与群の死亡例で腺胃または前胃粘膜の暗赤色斑が認められたが，雌雄とも生存例では変化は認められなかった．

本試験条件下での4-(1-メチルエテニル)フェノールのLD50値は雌雄とも585.8 mg/kgであった．

方法

1.　被験物質および対照物質の調製

被験物質は，4-(1-メチルエテニル)フェノール[ロット番号:001109，純度:99 %以上，提供者:三井化学(株)(東京)]で，蒸気圧3333 Pa(142 ℃)，融点80〜83 ℃，比重0.35〜0.4，引火点120〜125 ℃(セタ密閉式)の水に難溶，メチルアルコールおよびアセトンに可溶の白〜淡黄色の粉体である．4-(1-メチルエテニル)フェノールは室温ではゆるやかに2量化することから，遮光気密容器に入れ，-10 ℃以下に設定された冷凍庫に保存した．試験期間中の被験物質の安定性を，残余被験物質を用いた純度の分析成績により確認した．

0.5 %カルメロースナトリウム水溶液を用いて被験物質を用時に懸濁した．調製液は調製後速やかに遮光気密容器に入れ投与に用いた．

投与に先立って15および120 mg/mL調製液中の4-(1-メチルエテニル)フェノールの均一性および安定性ならびに投与に用いる各濃度の調製液中の4-(1-メチルエテニル)フェノール濃度を分析して確認した．

2.　試験動物および飼育条件

日本チャールス・リバー(株)厚木飼育センター生産のSPF Crj:CD(SD)IGSラットを4週齢で購入し，7日間馴化飼育を行い，雌雄各25匹を5週齢で試験に供した．投与前日の体重に基づいて層化無作為抽出法により群分けを行った．

動物は温度22〜25 ℃，湿度53〜63 %，換気回数10〜15回/時間，照明時間8〜20時でブラケット式金属製金網床ケージに，群分け前は1あるいは3匹，群分け後は1匹収容した．飼料はγ線照射固型飼料CRF-1(オリエンタル酵母工業(株))を金属製給餌器により，飲料水は札幌市水道水を自動給水装置により，それぞれ自由摂取させた．

3.　投与量および投与方法

致死量の概要を検索するために，雌雄各1群3匹のCrj:CD(SD)IGSラットに4-(1-メチルエテニル)フェ ノールの60，200，600および2000 mg/kgを単回経口投与した結果，60および200 mg/kg投与群では死亡は認められず，600 mg/kg投与群では雄2例，雌1例，2000 mg/kg投与群では雌雄各3例が投与後2日までに死亡し，50 %致死量は約600 mg/kgと考えられた．このことから，本試験では600を中心に公比2で150，300，600および1200 mg/kg投与群を設定し，これに対照として0.5 %カルメロースナトリウム水溶液を投与する群を加え計5群を設定した．

一晩(17〜18時間)の絶食後，10〜11時の間に胃ゾンデを用いて強制的に胃内に10 mL/kgの投与容量で経口投与し，投与後約4時間を経過した時点で給餌を再開した．

4.　検査項目

1)　一般状態観察

生死，外観，行動等を，投与日(0日)の投与直後から投与後1時間までは連続して観察し，以降は投与後2，4および6時間に観察した．投与後1日から投与後14日の剖検日までは，1日1回観察した．

2)　体重測定

体重を0(投与日の投与前)，投与後1，3，5，7，10および14日(剖検日)に，電子式上皿天秤を用いて測定した．0日から投与後14日までの体重増加量および体重増加率を算出した．

3)　剖検

死亡例は発見後速やかに，生存例は投与後14日の剖検日に体外表を観察後，エーテル麻酔下で放血致死させ，いずれも全身の器官・組織を肉眼的に観察した．

5.　統計解析

probit法を用いてLD50値の算出を行った．

体重，体重増加量および体重増加率について，Bartlettの検定法によって等分散性を解析し，等分散の場合は一元配置分散分析法，不等分散の場合はKruskal-Wallisの検定法で解析した．一元配置分散分析の結果，有意差がみられた場合は，Dunnettの検定法を用いて，Kruskal-Wallis法の解析の結果，有意差がみられた場合は，Mann-WhitneyのU-検定法を用いてそれぞれ対照群との比較を行った．対照群との比較検定については，危険率5 %未満を統計学的に有意とした．

結果

1.　死亡状況およびLD50値(Table 1)

投与後6時間から3日までに雌雄の600 mg/kg投与群で各3例，1200 mg/kg投与群で全例が死亡した．LD50値は雌雄とも585.8 mg/kgであった．

2.　一般状態

150および300 mg/kg群では，150 mg/kg投与群の雌1例で投与後1日に外尿道口周囲被毛の汚れがみられたのみであった．

600 mg/kg投与群の雄では，投与後2〜4時間に自発運動の減少がみられた1例が投与後6時間に死亡した．また投与後2〜6時間に自発運動の減少，血尿，呼吸緩徐，体温低下等がみられた2例は，投与後1日に死亡した．

雌でも，投与後2〜6時間に自発運動の減少，呼吸緩徐，腹臥，血尿等がみられた2例は，投与後1日に死亡した．投与後1〜2日に呼吸促迫および外尿道口周囲被毛の汚れがみられた1例は投与後3日に死亡した．他の2例でも外尿道口周囲被毛の汚れ等がみられたが，投与後2または5日には回復した．

1200 mg/kg投与群の雄では，投与後1または2〜6時間に，自発運動の減少，よろめき歩行，腹臥，横臥，呼吸促迫，呼吸緩徐，体温低下等がみられた5例(全例)が投与後1日に死亡した．

雌では，投与後2〜6時間に腹臥，呼吸緩徐，横臥がみられた1例は，投与後6時間に死亡した．投与後1〜6時間に，よろめき歩行，自発運動の減少，横臥，呼吸緩徐，呼吸促迫等がみられた4例は，投与後1日に死亡した．

3.　体重

150および300 mg/kg投与群では，雌雄とも変化は認められなかった．

600 mg/kg投与群の生存例では，雌雄とも投与後に低値傾向で推移し，雄では投与後3および5日に，雌では投与後1から10日まで有意な低値が認められた．投与後14日間の体重増加量および体重増加率にも低値傾向がみられ，雄の体重増加率では有意な低値が認められた．

4.　剖検

死亡例では，600 mg/kg投与群の投与後3日の雌1例で，脾臓の萎縮と前胃粘膜の多巣性の微細暗赤色斑および腺胃粘膜の暗赤色斑がみられ，また1200 mg/kg投与群の投与後6時間の雌1例でも腺胃粘膜の暗赤色斑が認められた．

生存例では，各投与群の雌雄ともに変化は認められなかった．

考察

600 mg/kg以上の投与群で雌雄とも投与後1時間から呼吸緩徐，血尿，体温低下，腹臥，自発運動の減少，よろめき歩行，呼吸促迫および口周囲または外尿道口周囲被毛の汚れ等の毒性徴候が観察され，死亡例も認められた．死亡は投与後6時間から3日までの間に，600 mg/kg投与群で雌雄各3例，1200 mg/kg投与群で雌雄全例にみられたが，雌雄とも300 mg/kg以下の投与群では死亡例はなく，最大耐量は300 mg/kgであった．

体重では，雌雄の600 mg/kg投与群の生存例で体重増加抑制が認められたが，300 mg/kg以下の投与群で変化は認められなかった．

剖検では，雌の600 mg/kg投与群および1200 mg/kg投与群の各1例で腺胃粘膜の暗赤色斑がみられ，600 mg/kg投与群の1例では前胃粘膜の暗赤色斑と脾臓の萎縮も伴っていた．腺胃または前胃の暗赤色斑は被験物質による傷害性変化あるいは循環障害によると考えられたが，脾臓の萎縮は発現した毒性徴候等に付随した二次的な消耗性の変化と考えられた．

4-(1-メチルエテニル)フェノールの本試験条件下でのLD50値は雌雄とも585.8 mg/kgであった．

連絡先
試験責任者：須永昌男
試験担当者：木口雅夫，咲間正志，笠原みゆき，平田真理子，古川正敏
(株)化合物安全性研究所
〒004-0839　札幌市清田区真栄363-24
Tel 011-885-5031Fax 011-885-5313

Correspondence
Authors:Masao Sunaga(Study director)
Masao Kiguchi, Masashi Sakuma, Miyuki Kasahara, Mariko Hirata, Masatoshi Furukawa
Safety Research Institute for Chemical Compounds Co., Ltd.
363-24 Shin-ei, Kiyota-ku, Sapporo-shi, Hokkaido, 004-0839, Japan
Tel +81-11-885-5031Fax +81-11-885-5313