1-メトキシナフタレンのラットを用いる
単回経口投与毒性試験

Single Dose Oral Toxicity Test of 1-Methoxynaphthalene in Rats

要約

既存化学物質の毒性学的性質を評価するために， 1-メトキシナフタレンを雌雄ラットに1回経口投与し，その毒性について検討した．投与量は2000 mg/kgを高用量とし，以下1000および500 mg/kgとした．対照として媒体(コーンオイル)投与群を設けた．

死亡例は 2000 mg/kg群の雌で2/5例にみられた．

一般状態観察において， 500および1000 mg/kg群では雌雄とも投与日に自発運動の低下，眼瞼下垂がみられた．2000 mg/kg群では，雌雄とも投与日に自発運動の低下，眼瞼下垂，流涙がみられた．

体重は， 1000および2000 mg/kg群では雌雄とも増加抑制傾向を示した．

剖検において，死亡例，生存例とも異常はみられなかった．

1-メトキシナフタレンのLD50値は，雄で2000 mg/kg以上，雌で2000 mg/kg付近と考えられる．

方法

1.　被験物質，媒体および投与検体

被験物質の 1-メトキシナフタレン(CAS No.2216-69-5)は東京化成工業(株)から購入したもの(Lot No.FID01，純度：99.1％，分子量：158.20，淡黄色透明の液体，水に不溶)を室温・遮光下で気密容器に入れて保管し，使用した．投与終了後に被験物質の一部を製造元に送付して分析した結果，純度は99.1％であり，使用期間中の安定性が確認された．

被験物質は秤取し，コーンオイルに溶解して必要濃度の投与検体を用時調製した．また，被験物質は純度換算しないで，投与量は原体重量で表示した．

2.　使用動物および飼育条件

4 週齢のSprague-Dawley系雌雄ラット［Crj：CD(SD)，(SPF)］を日本チャールス・リバー(株)から購入した．入手した動物は，5 日間の検疫期間およびその後 3日間の馴化期間を設け，一般状態および体重推移に異常の認められない動物を群分けして試験に用いた．群分けは，コンピュータを用いて体重を層別に分けた後に，無作為抽出法により各群の平均体重および分散がほぼ等しくなるように投与日に行った．

動物は，室温 20〜24℃，湿度40〜70％，明暗各12 時間(照明：午前6時〜午後6時)，換気回数12回／時に設定した飼育室で飼育した．検疫・馴化期間中および絶食期間中はステンレス製懸垂式ケージを用いて1ケージあたり5匹までの群飼育とし，群分け後はステンレス製五連ケージを用いて個別飼育した．

飼料は固型飼料 (CRF-1，オリエンタル酵母工業(株))を，飲料水は水道水をいずれも自由に摂取させた．ただし，投与前日の夕刻から投与までの約19時間と投与後約6 時間まで絶食させ，群分け時から投与後約6時間までは絶水させた．

3.　投与経路，投与方法，群構成および投与量

1-メトキシナフタレンは，経口的に人に摂取される可能性が考えられるため，投与経路として経口投与を選択した．投与に際しては，金属製経口胃ゾンデを取り付けたプラスチック製ディスポーザブル注射筒を用いて，強制経口投与した．投与液量は，投与直前に測定した体重を基準として10 ml/kgで算出した．投与回数は1回とした．投与日の週齢は6週齢であり，体重範囲は雄が119〜126 g，雌が92〜101 gであった．

投与量は，先に実施した雄ラットを用いた予備試験 (投与段階：0，80，400および2000 mg/kg)の結果を参考にして設定した．すなわち，各群とも死亡発現はなかったが，一般状態観察において400 mg/kg投与により投与直後に流涙，2000 mg/kg投与により投与直後に流涙，流涎，自発運動の低下および眼瞼下垂がみられた．そこで，当試験では，予備試験結果に基づき，2000 mg/kgを高用量とし，以下公比2で1000および500 mg/kg投与群を設定した．また，対照として被験物質と同一液量の媒体(コーンオイル)を投与する群を設けた．

4.　観察および検査項目

1)　観察期間

観察期間は，投与後 14 日間とした．

2)　一般状態

投与日は投与前および投与後 6時間(投与後30分まで，投与後2，4および6時間)まで，投与翌日からの観察期間中は1日1回，一般状態および死亡の有無を観察した．

3)　体重測定

投与日および投与後 1，3，7，10ならびに14日に測定した．

4)　剖検

死亡動物は発見後速やかに剖検した．生存動物は観察期間終了時にエーテル麻酔下で腹大動脈から放血致死させた後に剖検した．

5.　統計解析

体重は，各群で平均値および標準偏差を算出した．有意差検定は対照群と各投与群の間で多重比較検定を用いて行い，危険率 5％未満を有意とした．すなわち，Bartlett法による等分散性の検定を行い，等分散の場合には一元配置法による分散分析を行い，有意ならばDunnett法またはScheff法を用いて行った．一方，等分散と認められなかった場合は順位を利用した一元配置法による分析(Kruskal-Wallisの検定)を行い，有意ならば順位を利用したDunnett法またはScheff法を用いて行った．

結果

1.　一般状態および死亡状況(Table 1)

対照群， 500および1000 mg/kg群の雌雄ならびに2000 mg/kg群の雄では，死亡発現はなかった．2000 mg/kg群の雌で投与後1日に2例が死亡した．

対照群では，雌雄とも観察期間中に異常症状はみられなかった． 500 mg/kg群では，雌雄とも投与日の投与後約25分〜2時間に自発運動の低下が2〜5例，投与後約25分〜6時間に眼瞼下垂が各5例にみられたが，投与後 1 日以降には異常は認められなかった．1000 mg/kg群では，雄で投与日の投与後約10分〜6時間に自発運動の低下および眼瞼下垂が各 5 例にみられたが，投与後1日以降には異常は認められなかった．1000 mg/kg群の雌では，投与日の投与後約 15 分〜6 時間に自発運動の低下および眼瞼下垂が各5例にみられたが，投与後1日以降には異常は認められなかった．2000 mg/kg群では，雄で投与日の投与後約10分〜6 時間に自発運動の低下および眼瞼下垂が各5例，投与後約15分に流涙が3例，投与後約23分に流涎が1例にみられたが，投与後1日以降には異常は認められなかった．2000 mg/kg群の雌では，投与日の投与後約10分〜6時間に自発運動の低下および眼瞼下垂が各5例，投与後約15〜25分に流涙が4例にみられ，2例が投与後1日に死亡した．なお，生存例では，投与後1日以降には異常は認められなかった．

2.　体重推移

500 mg/kg群は，雌雄とも対照群とほぼ同様の体重推移であり，いずれの測定日とも有意差はみられなかった．1000 mg/kg群では，雄で対照群と比べて投与後1および 3日に体重の有意な低値，雌で体重の増加抑制傾向がみられた．2000 mg/kg群では，雄で投与後1日より減少し，対照群と比べて投与後1〜14日に体重の有意な低値がみられた．また，雌でも投与後1日には投与日より減少した．

3.　剖検所見

死亡例において， 2000 mg/kg群の雌2例では異常はみられなかった．

生存例において，いずれの群の雌雄とも，異常はみられなかった．

考察

1-メトキシナフタレンは2000 mg/kg投与によって雄では死亡発現がなく，雌では2/5例に死亡が認められた．したがって，LD50値は雄で2000 mg/kg以上，雌で2000 mg/kg付近と考えられる．一般状態では，500および 1000 mg/kg群で自発運動の低下および眼瞼下垂，2000 mg/kg群で自発運動の低下，眼瞼下垂，流涙および流涎が投与直後よりみられたが，投与後1日以降異常は認められなかった．なお，1000および2000 mg/kg群では体重の増加抑制がみられたが，生存例，死亡例とも剖検所見に異常は認められなかった．1-メトキシナフタレンの単回経口投与による毒性は雄より雌に強く発現すると考えられた．なお，2000 mg/kg群の雌 2 例の死亡原因は当試験では明らかにできなかった．

連絡先
試験責任者：古橋忠和
試験担当者：長瀬孝彦，虫賀勇樹，松井英児，
吉島賢一，牧野浩平
(株)日本バイオリサーチセンター　羽島研究所
〒501-62　岐阜県羽島市福寿町間島6-104
Tel 058-392-6222Fax 058-392-1284

Correspondence
Authors:Tadakazu Furuhashi (Study director)
Takahiko Nagase, Yuuki Mushiga,
Eiji Matsui, Ken-ichi Yoshijima and
Kohei Makino
Nihon Bioresearch Inc. Hashima Laboratory
6-104 Majima, Fukuju-cho, Hashima, Gifu, 501-62, Japan
Tel +81-58-392-6222Fax +81-58-392-1284