6-tert-ブチル-2,4-キシレノールのラットを用いる
単回経口投与毒性試験
Single Dose Oral Toxicity Test of 6-tert-Butyl-2,4-xylenol in Rats
要約
既存化学物質の安全性を評価するため，6-tert-ブチル-2,4-キシレノールを雌雄のCrj:CD (SD) 系ラットに単回経口投与し，急性毒性を検討した．なお，投与量は雄で819，1024，1280，1600および2000 mg/kgの5用量とし，雌で655，819，1024，1280および1600 mg/kgの5用量とした．
死亡例は，雄では1024 mg/kg，雌では819 mg/kg以上の群で認められ，雄では2000 mg/kg群，雌では1280 mg/kg以上の群で全例が死亡した．LD50値は雄で910 mg/kg（95%信頼限界570〜1452 mg/kg），雌で972 mg/kg（95%信頼限界814〜1162 mg/kg）であった．一般状態の変化としては，多数例に自発運動低下および腹臥位が観察され，さらに死亡例では側臥位，体温低下および褐色尿が観察された．また，生存した一部の例には，歩行異常が観察された．生存例の体重は，雌雄ともに観察期間終了時まで順調に増加した．病理学検査のうち肉眼的観察所見では，死亡例において胸水の貯留，胸腺の黒色斑点，膀胱の黒色斑点，褐色尿の貯留，前胃の白色斑点，腺胃の黒色斑点，小腸の白色，褐色あるいは黒色内容物，小腸の白色斑点および大腸の白色内容物が認められた．また，観察期間終了時の生存動物では肝臓の黄色斑点，肝臓と脾臓，横隔膜あるいは後腹膜の癒着，脾臓の萎縮，脾臓と腎臓の癒着，前胃の肥厚および前胃と肝臓あるいは横隔膜の癒着が認められた．病理組織学検査では，観察期間終了時の雄の生存例において，前胃に高度の潰瘍および肉芽腫性炎あるいは扁平上皮細胞の増生および肉芽腫性炎がみられ，肝臓に肉芽腫性炎が認められた．
方法
1.被験物質
6-tert-ブチル-2,4-キシレノール（CAS No.1879-09-0，東京化成工業(株)，Lot.No. FGC01，純度98.5%，分子量178.30，凝固点21.5 ℃）はごく薄い黄色を呈した透明の液体であり，使用時まで室温条件下で密閉遮光保管した．
2.供試動物
生後5週の Crj:CD (SD) 系ラット (SPF) 雌雄各30匹を日本チャールス・リバー(株)から購入した．8日間にわたり動物を検疫・馴化飼育した後，6週齢で試験に用いた．投与時の体重は，雄で145〜164 g，雌で116〜145 gであった．
3. 飼育
動物は，温度23±2 ℃，湿度55±10%，換気回数20回／時間，照度150〜300 lux ，照明時間12時間（午前7時点灯，午後7時消灯）に設定された飼育室で，(株)東京技研サービスの自動水洗式飼育機を使用し，ステンレス製網目飼育ケージに5匹ずつ収容して飼育した．飼育ケージおよび給餌器は週1回取り換えた．動物には、オリエンタル酵母工業(株)製造の固型飼料MFを自由に摂取させ，飲料水としては，水道水を自由に摂取させた．
4.用量設定理由
本試験に先立ち，500，1000および2000 mg/kgの用量を雌雄各3匹のラットに投与した予備試験の結果，雌雄ともに500 mg/kg群では死亡例が認められなかったが，1000 mg/kg群で各1例，2000 mg/kg群では全例が死亡した．この結果を参考にして，本試験では雄で819，1024，1280，1600および2000 mg/kgの5用量を，雌で655，819，1024，1280および1600 mg/kgの5用量を設定した．
5.群分け
動物はあらかじめ体重によって層別化し，無作為抽出法により各試験群を構成するように群分けした．
6.投与液の調製および投与方法
所定量の被験物質をコーンオイル（ナカライテスク(株)）に溶解した．溶液の濃度は，655，819，1024，1280，1600および2000 mg/kg群で，それぞれ13.1，16.4，20.5，25.6，32.0および40.0 w/v%であった．
投与経路は経口とし，16時間絶食させた動物に上述の被験物質溶液を注射ポンプおよび胃ゾンデを用い，投与した．投与容量は体重100 gあたり0.5 mlとし，個体別に測定した体重に基づいて算出した．給餌は被験物質投与3時間後に行った．
7.一般状態の観察
中毒症状および生死の観察は，投与6時間までは1時間毎に，以後1日2回午前と午後（休日は午前のみ）14日間にわたって実施した．
8. 体 重
体重は投与直前，投与7および14日に測定した．また，死亡例については死亡発見時に測定した．
9. 50%致死量(LD50)の算出
Litchfield-Wilcoxon（1949）の方法により，投与14日の死亡率からLD50値およびその95%信頼限界を算出した．
10.病理学検査
観察期間中の死亡例については死亡発見時に，また生存例については観察期間終了時にエーテル麻酔後放血安楽死させ解剖した．肉眼的な異常の認められた器官，組織について記録するとともに，10%中性緩衝ホルマリン液に保存し，その一部を病理組織学検査に供した．
結果
1.死亡率およびLD50値
雄では1024 mg/kg，雌では819 mg/kg以上の群で死亡が認められ，雄では2000 mg/kg群，雌では1280 mg/kg以上の群で全例が死亡した．これらの死亡例は，雄で投与6時間から4日，雌で投与6時間から2日までに認められた．LD50値は雄で910 mg/kg（95%信頼限界570〜1452 mg/kg），雌で972 mg/kg（95%信頼限界814〜1162 mg/kg)であった．
2. 一般状態
全用量群の雌雄に共通して，自発運動低下および腹臥位が投与1ないし2時間から認められ，さらに生存例では一部の例に円背位が投与4時間以降にみられ，雄の1600 mg/kg以下，雌の1024 mg/kg以下の群では，投与6時間以降に歩行異常が観察された．
死亡例では，側臥位および体温低下が投与5時間以降に雄で1024 mg/kg以上，雌で819 mg/kg以上の群で観察され，さらに一部の例に円背位が投与4時間以降，褐色尿が投与2ないし3日に認められた．生存例の症状は，投与4から6日の間に回復した．
3.体重
死亡例では，雌雄ともに投与直前の測定値と比較して死亡時の体重減少が認められた．一方，生存例では雌雄ともに投与７および14日の測定で順調な増加が認められた．
4.病理学検査所見
死亡例の肉眼的観察所見では雌雄ともに胸腺の黒色斑点，褐色尿の貯留，小腸の黒色内容物および白色斑点が認められ，さらに雄で胸水の貯留，膀胱の黒色斑点，前胃の白色斑点，腺胃の黒色斑点，小腸および大腸の白色内容物が，雌で小腸の褐色内容物が認められた．一方，観察期間終了時の生存例では雌雄ともに前胃と横隔膜の癒着が認められ，さらに雄で肝臓の黄色斑点，前胃と肝臓の癒着，肝臓と横隔膜あるいは後腹膜の癒着，肝臓と脾臓の癒着，脾臓と腎臓の癒着および前胃の肥厚が，雌で脾臓の萎縮が認められた．また，病理組織学検査では，観察期間終了時の雄の生存例において，前胃に高度の潰瘍および肉芽腫性炎あるいは扁平上皮細胞の増生および肉芽腫性炎がみられ、肝臓に肉芽腫性炎が認められた．
考察
1群雌雄各5匹のCD(SD)系ラットを用いて，6-tert-ブチル-2,4-キシレノールの単回経口投与毒性試験を実施した．投与用量は，雄では819，1024，1280，1600および2000 mg/kgの5用量とし，雌では655，819，1024，1280および1600 mg/kgの5用量とした．
その結果，死亡例では前胃および小腸の白色斑点，腺胃の黒色斑点などが認められ，被験物質が消化器系粘膜に対して強い刺激性または腐食性の障害を与えたものと考えられた．また，生存例では，前胃が関与した腹腔内器官の癒着が認められたため，病理組織学検査を実施した結果，前胃に高度の潰瘍および肉芽腫性炎が認められた．これらの器官間の癒着は，被験物質投与によって前胃の漿膜面が炎症性変化を起こし，次いで壁側，腑側の向かい合う器官面と癒着したものと考えられた．
| 連絡先 |
| 試験責任者： | 大庭耕輔 |
| 試験担当者： | 藤島 敦 |
| （財）食品農医薬品安全性評価センター |
| 〒437-12 静岡県磐田郡福田町塩新田字荒浜582-2 |
| Tel 0538-58-1266 | Fax 0538-58-1393 | |
| Correspondence |
| Authors: | Kousuke Oba（Study director)
Atsushi Fujishima |
| Biosafety Research Center, Foods, Drugs and Pesticides (An-Pyo Center) |
| 582-2 Shioshinden Arahama, Fukude-cho, Iwata-gun,
Shizuoka, 437-12, Japan |
| Tel +81-538-58-1266 | Fax +81-538-58-1393 | |