微生物を用いた銅フタロシアナートの変異原性試験

Mutagenicity test of Phthalocyanine Blue with the Salmonella/microsome Assay (Ames Test)

要約

染色工場などでよく使用される銅フタロシアナートについてSalmonella typhimurium TA100、TA98、TA97、TA102を用いて遺伝子突然変異試験を行った。代謝活性化にはPCB誘導のFisherラットの肝ホモジェネートを用い、最高濃度5 mg/plateまで試験した。その結果、銅フタロシアナートは代謝活性化の有無にかかわらず、いずれの菌株にも変異原性を示さなかった。

緒言

S.typhimurium TA株を用いる変異原性試験は最も汎用されている変異原性試験の一つであり、求電子的にDNAに作用する発癌物質の多くが、この試験で陽性結果を示すことが報告されている。既存化学物質毒性試験の一環として、銅フタロシアナートについて微生物を用いる遺伝子突然変異試験を行い、変異原性の有無を調べた。

方法

微生物を用いる遺伝子突然変異試験は、S.typhimurium TA100（塩基置換型変異原検出用）、TA98、TA97（フレ−ムシフト型変異原検出用）、およびTA102（架橋型、酸化型変異原検出用）の4菌株を用い、37℃、20分間のプレインキュベーションを含むエームス法で行っ た1, 2）。代謝活性化法に必要なS9はFischerラット雄（5週令、80-100g）にKC-400を500 mg/kg投与した後、常法に従って調製した。S9 mix ( 0.5 ml）中には、S9 ( 50 μl)、G6P（2.5μmol）、NADPH（2μmol）、NADH（2 μmol）、MgCl2（4 μmol）、KCl（16.5 μmol）、リン酸ナトリウム（pH7.4, 40 μmol）が含まれている。

被験物質はdimethyl sulfoxide（DMSO）に溶解し、最高濃度5 mg/plate、8段階濃度をとって試験を行った。濃度に依存して誘発復帰変異コロニ−数が上昇し、しかもその数が自然復帰コロニ−数の2倍を越えた場合を陽性とした。陽性対照としては、−S9 mixの条件下ではTA100、TA98にAF-2、TA102 mitomycin C（MMC）、TA97にICR-191を、＋S9 mixの条件下では、いずれの株に対しても2-aminoanthracene（2AA）を用いた。

結果

今回供試された被験物質銅フタロシアナートは、いずれの菌株に対しても、S9 mixの有無にかかわらず、有意な復帰変異コロニ−数の増加を示さなかった（Table 1）。

考察

銅フタロシアナートについては、今回の我々の実験結果と同様、エームス試験で陰性の結果が報告されている3, 4）。さらに、ラット肝初代培養細胞を用いるUDS（不定期DNA合成）試験、マウスリンパ腫細胞を用いる遺伝子突然変異試験、マウスC3H/10T1/2細胞を用いるcelltransformation assayで陰性4）と報告されている。

文献

1)B. N. Ames, J. McCann and E. Yamasaki, Mutat. Res., 31, 347 (1975).
2)D. M. Maron and B. N. Ames, Mutat.Res., 113, 173 (1983).
3)M. Manandhar, P. Bahr, L. Dulak, J. C. Eastman and M. J. Iatropoulos, Environ. Mutagen., 4, 393 (1982).
4) P. Milvy and K. Kay, J.Toxicol. Environ. Health, 4, 31-36 (1978). P. Milvy and K. Kay, J.Toxicol. Environ. Health, 4, 31-36 (1978).

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試験責任者祖父尼俊雄
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Correspondence:
Sofuni, Toshio
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