ジビニルベンゼンのラットを用いる単回経口投与毒性試験

Single Dose Oral Toxicity Test of Divinylbenzene in Rats

要約

ジビニルベンゼンを雌雄ラットに1回経口投与し，その毒性について検討した．投与量は2000 mg/kgを高用量とし，以下1000および500 mg/kgとした．対照として媒体(コーンオイル)投与群を設けた．

死亡は，いずれの群の雌雄にも発現しなかった．500 mg/kg以上の群で雌雄とも体重の低値が，2000 mg/kg群で雌雄とも自発運動の低下がみられた．剖検においては，異常はみられなかった．

ジビニルベンゼンのLD50値は，雌雄とも2000 mg/kg以上と考えられる．

方法

1.　被験物質および媒体

被験物質のジビニルベンゼンは，分子量:130.19，融点:-29℃，沸点:190〜200℃であり，常温において無色ないし淡黄色の透明液体である(Lot No. SXS2，新日鐵化学，純度:96.2 ％，ただし，不純物としてエチルビニルベンゼンを3.2 wt％，p-tert-ブチルカテコールを 1010 ppm，その他を0.6 wt％含有)．入手後は，冷蔵・遮光条件下で保管した．

被験物質は，コーンオイルで希釈して調製した．なお，2，20 および 200 mg/mLの調製液は，冷蔵・遮光条件下で7日間，さらに室温・遮光条件下で4時間保存しても安定性に問題のないことを確認した．

2.　使用動物および飼育条件

4 週齢のSprague-Dawley系雌雄ラット［Crj:CD(SD)IGS，(SPF)］を日本チャールス・リバーから購入した．入手した動物は，5日間の検疫期間およびその後3日間の馴化期間を設け，一般状態および体重推移に異常の認められない動物を群分けして試験に用いた．群分けは，コンピュータを用いて体重を層別に分けた後に，無作為抽出法により各群の平均体重および分散がほぼ等しくなるように投与日に行った．1 群の動物数は，雌雄各5匹とした．

動物は，室温20〜24℃，湿度40〜70 ％，明暗各12時間(照明:午前6時〜午後6時)，換気回数12回／時に設定した飼育室で飼育した．検疫・馴化期間中および絶食期間中はステンレス製ケージを用いて1ケージあたり5匹までの群飼育とし，群分け後はステンレス製ケージを用いて個別飼育した．

飼料は固型飼料(CRF-1，オリエンタル酵母工業)を，飲料水は水道水をいずれも自由に摂取させた．ただし，投与前日の夕刻から投与までの約20時間と投与後約6時間まで絶食させ，群分け時から投与後約6時間までは絶水させた．

3.　投与経路，投与方法，群構成および投与量

投与経路は経口投与を選択した．投与に際しては，金属製経口胃ゾンデを取り付けたプラスチック製ディスポーザブル注射筒を用いて，強制経口投与した．投与液量は，投与直前に測定した体重を基準として10 mL/kgで算出した．投与回数は1回とした．投与日の週齢は5週齢であり，体重範囲は雄が112〜120 g，雌が95〜103 gであった．

投与量は，先に実施した雄ラットを用いた予備試験(投与段階:0，125，500および2000 mg/kg)において，2000 mg/kgを投与しても死亡発現はなく，自発運動の低下，体重の低値が認められたのみであった．そこで，当試験では，2000 mg/kgを高用量とし，以下公比2で1000および500 mg/kgを設定した．また，対照として被験物質投与群の投与液と同一容量の媒体(コーンオイル)のみを投与する群を設けた．

4.　観察および検査項目

1)　観察期間

投与後 14 日間とした．

2)　一般状態

投与日は投与前および投与後6時間(投与後30分まで，投与後2，4および6時間)まで，投与翌日からの観察期間中は1日1回，一般状態および死亡の有無を観察した．

3)　体重測定

投与日および投与後1，3，7，10ならびに14日に測定した．

4)　剖検

観察期間終了時にエーテル麻酔下で腹大動脈から放血致死させた後に剖検した．

5.　統計解析

体重について，各群で平均値および標準偏差を算出した．有意差検定は対照群と各投与群の間でDunnettの多重比較検定を用いて行った．

結果

1.　一般状態および死亡状況

いずれの群の雌雄においても，死亡発現はみられなかった．

一般状態の観察において，2000 mg/kg群では雌雄とも自発運動の低下が投与後2〜6時間にみられた．その他には，下痢が対照群の雌を含む各群でみられたが，媒体として用いたコーンオイルに基づくものと考えられた．

2.　体重推移

500 mg/kg群では，雌雄とも投与後1日に体重の低値がみられた．1000 mg/kg群では，雌雄とも投与後1および3日に体重の低値がみられた．2000 mg/kg群では，雄で投与後1〜10日に，雌で投与後1および3日に体重の低値がみられた．

3.　剖検所見

いずれの群の雌雄とも，異常はみられなかった．

考察

ジビニルベンゼンは 2000 mg/kg投与によっても，雌雄ともに死亡の発現はなく，LD50値は雌雄とも2000 mg/kg以上と考えられる．なお，500 mg/kg以上の投与で雌雄とも体重の低値が，2000 mg/kg投与で雌雄とも自発運動の低下がみられた．

連絡先
試験責任者：古橋忠和
試験担当者：長瀬孝彦，内藤一嘉，虫賀勇樹，吉島賢一，
牧野浩平
日本バイオリサーチセンター　羽島研究所
〒 501-6251　岐阜県羽島市福寿町間島6-104
Tel 058-392-6222Fax 058-392-1284

Correspondence
Authors:Tadakazu Furuhashi(Study director)
Takahiko Nagase, Kazuyoshi Naitou,
Yuuki Mushiga, Ken-ichi Yoshijima and Kohei Makino
Nihon Bioresearch Inc. Hashima Laboratory
6-104, Majima, Fukuju-cho, Hashima, Gifu, 501-6251, Japan
Tel +81-58-392-6222Fax +81-58-392-1284