2,4,6-トリブロモフェノールのラットを用いる単回経口投与毒性試験
Single Dose Oral Toxicity Test of 2,4,6-Tribromophenol in Rats
要約
既存化学物質の安全性を評価するため，2,4,6-トリブロモフェノールを雌雄のCrj:CD(SD)系ラットに単回経口投与し，急性毒性を検討した．
投与量は雌雄ともに1000，1300，1690，2197および2856 mg/kgの5用量とした．
死亡動物は，雌雄とも1300 mg/kg以上の用量群で投与後3時間以降24時間までみられた．LD50値(95 %信頼限界)は雌雄ともに1486 mg/kg(1215〜1792 mg/kg)であった．
一般状態の観察では雌雄ともすべての用量群で自発運動低下が認められ，さらにほとんどの群で流涎を示す動物が認められた．1300 mg/kg以上のほとんどの群で主として死亡動物に間代性痙攣，振戦および腹臥位または側臥位が観察された．なお，観察期間終了時まで生存していた動物では投与後24時間には自発運動の低下のみが認められる程度で，投与後6日にはすべて回復した．
生存動物の体重は，雌雄とも投与後7および14日の測定で前回の測定値に比較して増加していた．
剖検では，雌雄ともに死亡動物，観察期間終了時の生存動物ともに肉眼的異常は認められなかった．
方法
1. 被験物質
2,4,6-トリブロモフェノール((株)マナック，広島)は，白色のフレーク状粉末で水に難溶，分子量330.80の物質である．本試験に用いたロット70909の純度は99.8 wt%であった．
2. 供試動物
5週齢のCrj:CD(SD)系ラット(SPF)雌雄各42匹を日本チャールス・リバー(株)(神奈川)から購入した．動物は検収後，試験環境に7日間馴化し，6週齢で投与した．
3. 飼育
動物は，温度23±2℃，湿度55±10 %，換気回数20回/時間，照度150〜300 Lx，照明時間12時間(午前7時点灯，午後7時消灯)に設定された飼育室で，(株)東京技研サービスの自動水洗式飼育機を使用し，ステンレス製網目飼育ケージに5匹ずつ収容して飼育した．飼育ケージおよび給餌器は週1回取り換えた．動物には，オリエンタル酵母工業(株)製造の固型飼料MFを自由に摂取させ，飲料水としては，水道水を自由に摂取させた．なお，飼育室の環境調節は試験期間中，目標範囲内であった．動物の馴化期間を含め，観察期間中データの信頼性に影響を及ぼしたと思われる環境要因の変化はなかった．
4. 用量設定理由
本被験物質の製品安全データシート(MSDS)に経口投与によるラットのLD50が2000 mg/kg以上であることが報告されているため，雌雄各5匹に2000 mg/kgを投与したところ，投与後24時間までの観察で雌雄ともに5例中4例が死亡した．一方，反復投与毒性・生殖発生毒性併用試験(試験番号3657)において28日目までに1000 mg/kg群で死亡動物が認められてない．以上のことから，投与用量は雌雄ともに1000〜2856 mg/kgの5用量(公比1.3)を設定した．
5. 群分け
動物はあらかじめ体重によって層別化し，無作為抽出法により各試験群を構成するように群分けした．動物の識別は耳介入墨法により行った．投与時の体重は，雄が175〜202 g，雌が130〜156 gであった．なお，余剰動物は炭酸ガス吸入法により安楽死させた．
6. 投与液の調製および投与方法
被験物質は200，260，338，439.4および571.2 mg/mLの濃度となるようにトウモロコシ油(ナカライテスク(株)，Lot No. V6B7902)に懸濁した．すべての投与群について投与液の濃度分析を実施した結果，設定濃度の89.3〜96.5 %の範囲であり，適切に調製されていた．
投与容量は体重100 gあたり0.5 mLとし，個体別に測定した体重に基づいて投与量を算出した．
投与回数は1回とし，投与前16時間絶食させた動物に金属製胃ゾンデを用いて強制経口投与した．給餌は被験物質投与後3時間に行った．
7. 一般状態の観察
中毒症状および生死の観察は，投与6時間までは1時間毎に，以後1日2回，14日間にわたって実施した．
8. 体重
体重は投与直前，投与後7および14日に測定し，死亡動物については死亡発見時にも測定した．
9. 50 %致死量(LD50)の算出
プロビット法により，投与後14日の死亡率からLD50値およびその95 %信頼限界を算出した．
10. 病理学検査
観察期間中の死亡例については死亡発見時に，また生存例については観察期間終了時にエーテル麻酔後放血安楽死させ解剖し，肉眼的病理所見を病理解剖所見用紙に記録した．
結果
1. 死亡率およびLD50値
死亡動物は，雌雄とも1300 mg/kg以上の用量群で投与後3から24時間の間に認められた．1000，1300，1690，2197および2856 mg/kg群の死亡率は雌雄ともにそれぞれ0，40，80，80および100 %で，LD50値(95 %信頼限界)は雌雄ともに1486(1215〜1792)mg/kgであった．
2. 一般状態
雌雄ともにすべての用量群で自発運動低下が投与後1ないし2時間から認められ，さらに，ほとんどの群で流涎を示す動物が認められた．1300 mg/kg以上のほとんどの群では主として死亡動物に投与後1ないし2時間から間代性痙攣が認められ，振戦も投与後3から6時間にかけて観察された．さらに投与後3時間以降に腹臥位または側臥位を示し死亡した．なお，観察期間終了時まで生存していた動物では投与後24時間には自発運動の低下のみが認められる程度で，投与後6日にはすべて回復した．
3. 体重
生存動物では雌雄とも投与後7および14日の測定で前回の測定値に比較して増加していた．
4. 病理所見
雌雄ともに死亡動物，観察期間終了時の生存動物ともに肉眼的異常は認められなかった．
考察
2,4,6-トリブロモフェノールについてラットを用いる急性経口毒性試験を実施した．
その結果，死亡動物は投与後3から24時間の間に認められた．中毒症状として，雌雄とも自発運動低下，流涎，振戦，間代性痙攣，腹臥位および側臥位がみられた．
剖検では雌雄の死亡動物，生存動物ともに肉眼的異常は認められなかった．
LD50値(95 %信頼限界)は雌雄ともに1486(1215〜1792)mg/kgであった．
| 連絡先 |
| 試験責任者： | 藤島 敦 |
| 試験担当者： | 藤原正孝 |
| (財)食品農医薬品安全性評価センター |
| 〒437-1213 静岡県磐田郡福田町塩新田582-2 |
| Tel 0538-58-1266 | Fax 0538-58-1393 | |
| Correspondence |
| Authors: | Atsushi Fujishima(Study director)
Masataka Fujiwara |
| Biosafety Research Center, Foods, Drugs and Pesticides(An-Pyo Center) |
| 582-2 Shioshinden, Fukude-cho, Iwata-gun, Shizuoka, 437-1213, Japan |
| Tel +81-538-58-1266 | Fax +81-538-58-1393 | |