シクロヘキセンのラットを用いる単回経口投与毒性試験

Single Dose Oral Toxicity Test of Methacrylamide in Rats

要約

既存化学物質の安全性を評価するため，シクロヘキセンの0，500，1000および2000 mg/kgを雌雄のCrj:CD(SD)系ラットに単回経口投与し，急性毒性を検討した．

死亡は，雌雄ともに2000 mg/kgで5例中3例に認められたが1000および500 mg/kg群に死亡例は認められなかった．一般状態の観察では雌雄ともに自発運動低下，流涙がみられ，死亡動物では歩行異常，腹臥位，流涎，立毛および振戦が認められた．体重は雌雄ともに1000および2000 mg/kgで投与後1日の測定で体重減少が認められたが，その後，生存動物は順調な体重増加を示した．剖検では，途中死亡例の肉眼観察において肺のびまん性赤色化，脾臓の淡色化および腺胃の黒色斑点が観察され，病理組織学的検査で肺にうっ血および浮腫，脾臓に濾胞萎縮，腺胃に出血が認められた．

以上の結果から，シクロヘキセンの雌雄ラットにおけるLD50値はともに1000〜2000 mg/kgの間にあると推定された．

方法

1.　被験物質

シクロヘキセン(Lot No. HE-00-02-09，純度98.6 wt%，旭化成工業(株)，岡山)は，水に不溶，アセトンに可溶な無色液体である．入手後の被験物質は冷暗所で保管し，投与終了後，提供元で分析を行い試験期間中安定であったことを確認した．

2.　供試動物

5週齢のCrj:CD(SD)系ラット(SPF)雌雄各24匹を日本チャールス・リバー(株)(神奈川)から購入した．動物は検収後，試験環境に7日間馴化し，6週齢で投与した．

3.　飼育

動物は，温度23.2〜24.4 ℃，湿度50〜64 %，照明時間12時間(午前7時点灯，午後7時消灯)に制御された飼育室で，ステンレス製網目飼育ケージに5匹ずつ収容して飼育した．動物には，オリエンタル酵母工業(株)製造の固型飼料MFおよび水道水を自由に摂取させた．

4.　用量設定理由

本試験に先立って実施した予備試験において2000 mg/kg群の雌で3例中1例が死亡したが，500および1000 mg/kg群の雌雄ならびに200 mg/kg群の雄に異常は観察されなかった．従って本試験の用量は雌雄ともにOECDガイドライン「急性経口」で上限用量として指定されている2000 mg/kgを最高用量とし，以下公比2で除して1000および500 mg/kgを設定し，さらに雌雄それぞれに媒体対照群を設置した．

5.　群分け

動物はあらかじめ体重によって層別化し，無作為抽出法により雌雄ともに各群5匹ずつ振り分けた．投与時の体重は，雄が161〜181 g，雌が122〜140 gであった．

6.　投与液の調製および投与方法

被験物質は100，200および400 mg/mLの濃度となるようにコーンオイル(ナカライテスク(株)，京都，Lot No. V7B5849)に溶解した．投与液の調製は用時に行った．投与液中の被験物質濃度(全濃度:n=3)を，調製後速やかに測定した結果，適切に調製されていたことが確認された．

投与容量は体重100 gあたり0.5 mLとし，個体別に測定した体重に基づいて投与量を算出した．

投与回数は1回とし，投与前16時間絶食させた動物に胃ゾンデを用いて強制経口投与した．給餌は被験物質投与後3時間に行った．

7.　一般状態の観察

中毒症状および生死の観察は，投与6時間までは1時間毎に，投与翌日からは1日2回，14日間にわたって実施した．

8.　体重

すべての動物の体重を投与直前，投与後7および14日に測定した．

9.　病理学検査

観察期間中の死亡例は死亡発見時に，生存動物は観察終了時にエーテル麻酔後放血安楽死させ解剖し，肉眼的病理所見を記録した．

なお，異常の認められた器官，組織については，10 %中性緩衝ホルマリン液に保存し，さらに被験物質によると思われる異常病変については代表例の病理組織学的検査を実施し，観察された所見およびその程度を記録した．

結果

1.　死亡率およびLD50値

死亡は，雌雄の2000 mg/kgで投与後3日までに5例中3例認められた．死亡率は0，500，1000および2000 mg/kgの各群で雌雄ともに0，0，0および60 %であり，LD50値は雌雄ともに1000〜2000 mg/kgの間にあると推定された．

2.　一般状態

雌雄ともにすべての被験物質投与群で投与直後から自発運動低下が認められ，さらに雌雄の1000および2000 mg/kgで投与直後に流涙が観察された．雌雄の2000 mg/kgでは5例中3例が投与後2日から歩行異常，腹臥位，流涎，立毛，振戦などの症状を示して死亡したが，生存した雌雄各2例ではこれらの症状は観察されなかった．なお，媒体対照群においては雌雄ともに異常は認められなかった．

3.　体重

雌雄の0および500 mg/kgではすべての動物が順調な体重増加を示したが，1000および2000 mg/kgでは投与後1日の測定で体重減少が認められた．その後，生存動物は順調な体重増加を示した．

4.　病理所見

途中死亡例では肉眼観察で肺のびまん性赤色化，脾臓の淡色化および腺胃の黒色斑点が観察され，代表例の病理組織学的検査で肺に中等度のうっ血および浮腫，脾臓に中等度の濾胞萎縮，腺胃に軽度の出血が認められた．観察期間終了時の解剖ではいずれの動物にも異常は認められなかった．

考察

シクロヘキセンについてラットを用いる単回経口投与毒性試験を実施した．

その結果，死亡動物は雌雄ともに2000 mg/kgで5例中3例に認められたが1000および500 mg/kg群に死亡例は認められなかった．一般状態では雌雄ともに自発運動低下，流涙がみられ，死亡動物では歩行異常，腹臥位，流涎，立毛および振戦が認められた．剖検では，途中死亡例の肉眼観察において肺のびまん性赤色化，脾臓の淡色化および腺胃の黒色斑点が観察され，病理組織学的検査で肺にうっ血および浮腫，脾臓に濾胞萎縮，腺胃に出血が認められた．

以上の結果から，シクロヘキセンの雌雄ラットにおけるLD50値はともに1000〜2000 mg/kgの間にあると推定された．

連絡先
試験責任者：藤島　敦
試験担当者：保母真由美
(財)食品農医薬品安全性評価センター
〒437-1213　静岡県磐田郡福田町塩新田582-2
Tel 0538-58-1266Fax 0538-58-1393

Correspondence
Authors:Atsushi Fujishima(Study director)
Mayumi Hobo
Biosafety Research Center, Foods, Drugs and Pesticides(An-Pyo Center)
582-2 Shioshinden, Fukude-cho, Iwata-gun, Shizuoka, 437-1213, Japan
Tel +81-538-58-1266Fax +81-538-58-1393