1-ブロモ-3-クロロプロパンのラットを用いる単回経口投与毒性試験

Single Dose Oral Toxicity Test of 1-Bromo-3-chloropropane in Rats

要約

1-ブロモ-3-クロロプロパンは抽出溶剤，脱脂混合剤，殺虫剤などに使用されている短鎖ハロゲン化アルカンの1種である1)．本物質の急性毒性を検討するため1群5匹からなる5週齢のラットに雄は500，800，1300および2000 mg/kg，雌は800および1300 mg/kgで単回経口投与した．また，媒体対照として雌雄各5匹にコーン油を投与した．

雄では1300 mg/kg投与群の1例，2000 mg/kg投与群の全例，雌では1300 mg/kg投与群の全例が，観察第2〜3日に死亡した．

雌雄被験物質投与群で流涎が観察されたほか，雄の2000および雌の1300 mg/kg投与群で自発運動の減少，腹臥位がみられた．

観察第2日に雌雄の800 mg/kg以上の投与群で，体重の増加抑制あるいは減少がみられた．

剖検では死亡例に肺の退縮不全，暗赤色部，脾臓の淡色化がみられ，組織学的に肺胞水腫，脾臓の萎縮がみられた．

1-ブロモ-3-クロロプロパンのLD50値は，雄で1300 mg/kgから2000 mg/kgの間，雌では800 mg/kgから1300 mg/kgの間であると推定された．

方法

1.　被験物質

被験物質として，東ソー(株)(東京)より提供された1-ブロモ-3-クロロプロパン(Lot No. 8917T，純度99.9 area%)を用いた．受領物質は，使用時まで遮光して室温で保管した．なお試験終了後，残余被験物質を提供元で再分析し，被験物質が試験期間中安定であったことを確認した．

投与検体の調製においては，各用量毎に被験物質を秤量し，所定濃度となるようにコーン油(Lot No. V8P7069，ナカライテスク(株)を加えて溶解し，投与時まで遮光して室温で保存し，調製2日後に使用した．本被験物質の0.4および20 w/v%の調製検体の，室温，遮光条件下での10日間の安定性を確認した．また，各投与検体の含量を測定した(104〜105 %)．

2.　使用動物および飼育方法

4週齢のSprague-Dawley系(Crj:CD(SD)IGS)雌雄ラットを，日本チャールス・リバー(株)筑波飼育センターから購入し，検疫と馴化を兼ねて7日間予備飼育した．試験には，予備飼育中の一般状態に異常が認められなかった雄25匹，雌15匹を用いた．雌雄とも検疫終了時の体重を基に体重別層化無作為抽出法により1群5匹からなる雄は5群に，雌は3群に分けた．投与開始時の週齢は，雌雄ともに5週齢であり，体重は雄が120.8〜134.0 g，雌が106.9〜116.2 gであった．

全飼育期間を通じ，動物を金属製金網床ケージに1匹ずつ収容し，温度23〜25 ℃，湿度50〜65 %，換気回数約15回/時，照明12時間(7時〜19時点灯)に設定された飼育室で，固型飼料(CE-2，日本クレア(株)および水道水(秦野市水道局給水)を自由に摂取させて飼育した．

3.　投与量の設定および投与方法

投与量は，予備試験の結果に基づいて決定した．すなわち，雌雄とも500 mg/kg以上で体重増加抑制，2000 mg/kgで全例の死亡が認められ，感受性に性差が認められなかったことから，雄について500，800，1300および2000 mg/kg(公比約1.5)の4用量を，雌については明らかな毒性が発現しかつ死亡しないと考えられた800および1300 mg/kgの2用量を設定した．また，媒体対照として雌雄各5匹にコーン油を10 mL/kg投与した．

投与容量は体重1 kg当たり10 mLとし，動物を約18時間絶食させた後，投与直前に測定した体重を基に投与液量を算出し，ラット用胃管を用いて強制的に単回経口投与した．給餌は投与後約3時間に行った．

4.　観察および検査

観察第1日(投与日)から14日間にわたって死亡の有無を確認し，各動物の一般状態を観察した．観察は投与日においては投与直後から1時間まで連続して行い，その後は投与後6時間まで約1時間間隔で実施した．観察第2日から15日までは毎日1回行った．

体重は生存した全例について，投与直前，観察第2，4，8，11および15日に測定した．また，死亡例については死亡発見時に体重を測定した．

剖検は，死亡例は発見時に，生存例は観察第15日にペントバルビタールナトリウム麻酔下で放血屠殺して実施した．死亡例の肺，脾臓を0.1 Mリン酸緩衝10 vol%ホルマリン溶液で固定し，パラフィン包埋後薄切してヘマトキシリン・エオジン染色標本を作製し，光学顕微鏡を用いてその組織を観察した．

結果

1.　死亡率およびLD50値(Table 1)

雄の2000 mg/kg投与群の全例，1300 mg/kg投与群の1例，雌の1300 mg/kg投与群の全例が死亡した．LD50値は，雄では1300 mg/kg〜2000 mg/kgの間，雌では800 mg/kg〜1300 mg/kgの間にあると推定された．

2.　一般状態

雌雄被験物質投与群では，投与直後より流涎がみられた．さらに雄では2000 mg/kg投与群で，流涎に引き続き投与日に流涙，自発運動の減少，閉眼，歩行失調等が観察され，観察第2日に4例，観察第3日に1例が死亡した．1300 mg/kg投与群では，流涙および半眼が観察された1例が観察第2日に死亡した．雌では，流涎，流涙，自発運動の減少，半眼，腹臥位，排便量の減少のほか，呼吸不整あるいは緩除呼吸が少数例に観察され，観察第2〜3日に全例が死亡した．雌雄の対照群および雄の500 mg/kg投与群では粘液便あるいは下痢が観察された．

3.　体重

雌雄対照群および雄の500 mg/kg投与群では，観察期間中順調な体重増加がみられた．雌雄とも，観察第2日に，800 mg/kg投与群では体重増加抑制が，1300 mg/kg以上の投与群の生存例では体重減少がみられ，生存例ではその後体重は増加したが，800 mg/kg投与群の雌を除いて観察第15日の体重は対照群の体重には至らなかった．また，死亡例では体重が増加することなく死に至った．

4.　病理学検査

死亡例において多くの例で肺の退縮不全および暗赤色部がみられた．観察第3日に死亡した例では，脾臓の淡色化もみられた．

雌雄対照群，雄の500および雌雄800 mg/kg投与群の剖検では，いずれの器官・組織にも変化は認められなかった．

死亡例の組織学検査では，肺に肺胞水腫と泡沫細胞浸潤，脾臓の萎縮がみられた．

考察

雄では，1300 mg/kg投与群の1例および2000 mg/kg投与群の全例に流涎がみられたほか自発運動の減少，腹臥位，閉眼等がみられて，投与翌日あるいは翌々日に全例が死亡した．死亡例の剖検においては肺の退縮不全あるいは暗赤色部，脾臓の淡色化がみられた．組織学検査では肺胞水腫，脾臓の萎縮が認められた．雌では，1300 mg/kg投与群の全例が死亡し，一般状態および病理所見では，雄の2000 mg/kg投与群と同様の変化が認められた．

これらのことから，1-ブロモ-3-クロロプロパンの投与により流涎が起き，1300 mg/kg以上の投与で一般状態が悪化し，肺胞水腫を生じたものと考えられ，その影響は雄に比較して雌で大きいものと推察された．

以上の結果から，1-ブロモ-3-クロロプロパンのLD50値は，雄では1300から2000 mg/kgの間，雌では800から1300 mg/kgの間であると推定された．

文献

1)M. Lag, E. J. Soderlund, J. G. Omichinski, G. Brunborg, J. A. Holme, J. E. Dahl, S. D. Nelson, E. Dybing, Chem. Res. Toxicol., 4, 528(1991).

連絡先
試験責任者：永田伴子
試験担当者：勝村英夫，松本浩孝，堀内伸二，三枝克彦，稲田浩子，安生孝子
(財)食品薬品安全センター秦野研究所
〒257-8523　神奈川県秦野市落合729-5
Tel 0463-82-4751Fax 0463-82-9627

Correspondence
Authors:Tomoko Nagata(Study director)
Hideo Katsumura, Hirotaka Matsumoto, Shinji Horiuchi, Katsuhiko Saegusa, Hiroko Inada, Takako Anjo
Hatano Research Institute, Food and Drug Safety Center
729-5 Ochiai, Hadano-shi, Kanagawa, 257-8523, Japan
Tel +81-463-82-4751Fax +81-463-82-9627