1,3-ジブロモプロパンのラットを用いる単回経口投与毒性試験

Single Dose Oral Toxicity Test of 1,3-Dibromopropane in Rats

要約

1,3-ジブロモプロパンをCrj:CD(SD)IGS系雌雄ラットに単回経口投与し，その毒性を検討した．投与量は，雌雄とも300，500，900および1500 mg/kgの4用量とし，対照群には媒体(トウモロコシ油)を投与した．

1500 mg/kg群の雌雄全例，900 mg/kg群の雌雄各4例および500 mg/kg群の雌1例が死亡した．死亡動物の一般状態の観察では，流涎および流涙が大半の動物に，自発運動の減少，異常歩行，腹臥・横臥，呼吸数減少が一部の動物にみられ，死亡は投与1〜3日後の間に認められた．一方，生存動物にみられた症状は300 mg/kg以上の群で流涎，500 mg/kg以上の群で流涙であった．これらの症状は投与後1日までには全て消失した．体重推移では，投与後1日に500 mg/kg以上の群の雌雄で明らかな増加抑制あるいは減少がみられた．この変化は雄で投与10日後，雌で投与3日後までに消失した．剖検では，死亡例において900 mg/kg群の雌で肝臓の退色，900 mg/kg群の雌雄と1500 mg/kg群の雄で腺胃の暗赤色巣，1500 mg/kg群の雌で胸水貯留がみられた．

以上の結果から，本試験条件下における1,3-ジブロモプロパンのLD50値(95 %信頼限界値)は，雄で734 mg/kg(592〜911 mg/kg)，雌で671 mg/kg(498〜903 mg/kg)であった．

方法

1.　被験物質および被験液の調製

1,3-ジブロモプロパン(東ソー(株)，東京，ロット番号07253，純度99.8 %)は無色透明の液体である．なお，投与終了後の残余被験物質について供給元で分析を行った結果，使用期間中は安定であったことが確認された．

被験物質は，投与容量が10 mL/kg体重となるようトウモロコシ油で希釈して30，50，90および150 mg/mL溶液を調製した．調製は投与日の5日前に行い，ポリ製遮光瓶に入れて使用時まで冷蔵庫(2〜7 ℃)に気密保存した．なお，上記条件下で被験液が安定性であることを確認した．また，投与に使用した被験液について測定した結果，適正濃度であった．

2.　試験動物および飼育条件

5週齢のCrj:CD(SD)IGS系SPFラットを日本チャールス・リバー(株)から購入し，7日間検疫・馴化飼育した後，健康な動物を選び6週齡で試験に供した．1群の動物数は雌雄とも5匹とし，投与日の体重範囲は雄で157〜175 g(平均値:167 g)，雌で116〜135 g(平均値:126 g)であった．

動物は，投与前日の体重により層別化し，無作為抽出法により各群の平均体重ができるだけ均等となるように割りつけた．

動物は，温度23 ± 3 ℃，相対湿度50 ± 20 %，換気回数1時間当たり10〜15回，照明1日12時間の飼育室で，金属製網ケージに1匹ずつ収容し，固型飼料(放射線滅菌CRF-1，オリエンタル酵母工業(株))および飲料水(水道水)を自由に摂取させて飼育した．

3.　投与量および投与方法

300，500，900および1500 mg/kgを1群雌雄各3匹のラットに投与した予備試験では，1500 mg/kg群の雌雄全例と900 mg/kg群の雌雄各2/3例が死亡した．これらの結果から，1500 mg/kgを最高用量とし，以下公比約1.7で900，500および300 mg/kgを設定し，これに対照群を加えて計5群を使用した．

動物は，投与前に約16時間絶食させたのち，所定濃度の被験液を10 mL/kg体重の容量で，胃ゾンデを用いて1回強制経口投与した．対照群には溶媒(トウモロコシ油)を同様に投与した．なお，投与後の給餌は投与6時間後に実施し，給水は投与に関係なく継続して行った．

4.　検査項目

観察期間は14日間とし，投与後6時間までは頻繁に，その後は1日1回以上一般状態および生死の観察を行った．体重は投与直前に測定し，これを投与液量の算出基準にした．さらに，投与後1，2，3，7，10および14日に体重を測定した．観察期間終了後，全動物をエーテル深麻酔下で放血致死させ，体外表の観察を行った後，頭部，胸部，腹部を含む全身の器官・組織の異常の有無を肉眼的に観察した．

5.　統計解析

投与後14日間の累積死亡率をもとに，Van der Waerden法を用いてLD50値とその95 %信頼限界値を求めた．体重については，まずBartlett法により各群の分散の均一性の検定を行った．その結果，分散が均一の場合にはDunnett法を用いて対照群と各投与群との平均値の差の検定を行った．分散が均一でない場合にはDunnett型のmean rank testを用いて対照群と各投与群との平均順位の差の検定を行った．

結果

1.　死亡状況およびLD50値(Table 1)

300 mg/kg群の雌雄と500 mg/kg群の雄では死亡は認められなかった．一方，500 mg/kg群の雌1/5例，900 mg/kg群の雌雄各4/5例および1500 mg/kg群の雌雄各5/5例が死亡した．LD50値(95 %信頼限界値)は，雄で734 mg/kg(592〜911 mg/kg)，雌で671 mg/kg(498〜903 mg/kg)であった．

2.　一般状態

死亡例では何ら症状を示さずに死亡した900 mg/kg群の雄1例を除く全例で流涎と流涙のいずれかあるいは両方が認められた．流涎は投与15分後〜2時間後からほとんどの動物に，流涙は投与1時間後〜投与1日後から約2/3例で認められた．これらの動物は投与1〜3日後に死亡し，一部の動物では投与6時間後以降，自発運動の減少，腹臥・横臥，呼吸数減少あるいは異常歩行を呈する例もみられた．

生存例では全ての被験物質投与群の雌雄で投与30分後から2時間後にかけて流涎が，500および900 mg/kg群の雌雄で投与1時間後〜6時間後にかけて流涙がみられた．更に，500 mg/kg群の雌雄各1例では投与1日後に異常歩行も認められた．しかし，投与2日後以降はいずれの生存例にも異常は認められなかった．

3.　体重

500 mg/kg以上の群の体重は，雌雄ともに投与1日後に明らかな増加抑制あるいは減少を示した．その後，体重の低値は雄で投与7日後まで，雌で投与2日後までみられたが，その後は対照群と同様の推移を示した．

4.　剖検

死亡例で，胸水貯留が1500 mg/kg群の雌1例，腺胃の暗赤色巣が900 mg/kg群の雌雄各1例と1500 mg/kg群の雄1例，肝臓の退色が900 mg/kg群の雌1例にみられた．生存例ではいずれの動物にも異常は認められなかった．

考察

死亡動物は雄で900 mg/kg以上，雌で500 mg/kg以上の群にみられ，LD50値(95 %信頼限界値)は雄で734 mg/kg(592〜911 mg/kg)，雌で671 mg/kg(498〜903 mg/kg)であった．

一般状態では，雌雄全ての被験物質投与群で流涎が，500 mg/kg以上の群の雌雄では流涙がみられ，これらの症状は被験物質の自律神経への作用を示唆するものと考えられた．死亡例ではこれらに加えて自発運動の減少，腹臥・横臥，呼吸数減少あるいは異常歩行を示す動物が少数例認められた．なお，異常歩行は500 mg/kg群の生存例にもみられた．

体重では，500 mg/kg以上の群の雌雄で投与1日後に明らかな増加抑制あるいは減少がみられた．この変化は雄では投与後7日，雌では投与後2日までみられ，被験物質の体重推移に対する影響は雄でやや強く発現した．

剖検では，死亡例で胸水貯留および肝臓の退色がみられ，被験物質投与による循環動態の悪化が示唆された．また，腺胃の暗赤色巣は全身状態の悪化による二次的変化と考えられた．生存例では，いずれの動物にも異常はみられず，被験物質投与の影響は認められなかった．

連絡先
試験責任者：榎並倫宣
試験担当者：大石　巧，津田敏治
(株)ボゾリサーチセンター御殿場研究所
〒412-0039　静岡県御殿場市かまど1284
Tel 0550-82-2000Fax 0550-82-2379

Correspondence
Authors:Tomonori Enami(Study director)
Takumi Ohishi, Toshiharu Tsuda
Gotemba Laboratory, Bozo Research Center Inc.
1284, Kamado, Gotemba-shi, Shizuoka, 412-0039, Japan
Tel +81-550-82-2000Fax +81-550-82-2379