細胞増殖抑制試験結果をもとに,短時間処理法で10 mM相当の濃度を含む263,525,1050 μg/mLの3用量を設定した.S9 mix存在下および非存在下で6時間処理(18時間の回復時間)後,標本を作製し,検鏡することにより染色体異常誘発性を検討した.
その結果,いずれの処理群においても,染色体の構造異常あるいは倍数性細胞の誘発作用は認められなかった.従って,263,525,1050 μg/mLの3用量を用いたS9 mix非存在下での連続処理法24時間処理で染色体異常試験を実施した.同試験法においても染色体の構造異常あるいは倍数性細胞の誘発作用は認められなかった.
以上の結果より,本試験条件下では2-(1-メチルエトキシ)エタノールは,染色体異常を誘発しない(陰性)と結論した.
| 成分 | S9 mix 1 mL中の量 |
| S9 | 0.3 mL |
| MgCl2 | 5 μmol |
| KCl | 33 μmol |
| G-6-P | 5 μmol |
| NADP | 4 μmol |
| HEPES緩衝液(pH 7.2) | 4 μmol |
| 蒸留水 | 残量 |
細胞を10 vol%中性緩衝ホルマリン液(和光純薬工業(株))で固定した後,0.1 w/v%クリスタル・バイオレット(関東化学(株))水溶液で10分間染色した.色素溶出液(30 vol%エタノール,1 vol%酢酸水溶液)を適量加え,5分間程度放置して色素を溶出した後,580 nmでの吸光度を測定した.各用量群について溶媒対照群での吸光度に対する比,すなわち細胞生存率を算出した.
その結果,いずれの処理法においても明確な細胞増殖抑制は観察されなかった(Fig. 1〜2).
なお,被験物質暴露終了時,pHの変動,析出等の特筆すべき変化は,いずれの試験用量においても観察されなかった.
さらに,染色体異常誘発に関して短時間処理法で陰性と判定されたことから,連続処理法24時間処理においても1050 μg/mL(10 mM相当)を最高処理濃度とし,以下公比2で減じた計3用量を設定した.
なお,陽性対照として,短時間処理法の場合,-S9処理でマイトマイシンC(MMC:協和醗酵工業(株))を0.1 μg/mL,+S9処理でシクロホスファミド(CP:塩野義製薬(株))を12.5 μg/mLの用量で,連続処理の場合MMCを0.05 μg/mLの用量で試験した.
すべての標本をコード化した後,染色体分析を実施した.
各試験群の構造異常を有する細胞あるいは倍数性細胞の出現頻度を,Fisherの直接確率計算法(有意水準0.05)を用いて検定した.また用量依存性については,Cochran Armitageの傾向検定(有意水準0.05)を用いて検定した.溶媒対照群と比較し被験物質処理群において有意差が認められ,かつ,再現性あるいは用量に依存性が認められた場合に陽性と判定した.
なお,本被験物質暴露終了時,pHの変動,析出等の特筆すべき変化は,いずれの処理法ならびに試験用量においても観察されなかった.
以上の試験結果から,本試験条件下において2-(1-メチルエトキシ)エタノールのチャイニーズハムスター培養細胞に対する染色体異常誘発性に関し,陰性と判定した.
なお,本被験物質[2-(1-メチルエトキシ)エタノール]の変異原性に関する文献報告はなかった.類縁体であるIsopropyl acetateは復帰変異試験で陰性との報告があった3).
Ethylene glycol monomethyl etherは培養細胞を用いたgpt遺伝子突然変異試験で陽性との報告があるが4),McGregorによるレビューでは復帰変異試験を含めた各種遺伝毒性試験で陰性と報告している5).また,ラットを用いたコメット試験では精巣で陽性,骨髄で陰性との報告があった6).Ethylene glycol monomethyl ether acetateは復帰変異試験で弱陽性あるいは疑陽性3),ショウジョウバエを用いた異数性検出試験で陽性7)との報告があった.
Ethylene glycol monobutyl etherは復帰変異試験で陰性3)あるいは陽性8, 9),培養細胞を用いる姉妹染色分体交換試験で陰性10),培養細胞を用いる染色体異常試験で陰性10, 11),培養細胞を用いる遺伝子突然変異試験で陽性12)との報告があった.さらに,マウスならびにラット小核試験で陰性13)との報告があった.吸入暴露でのがん原性試験においてマウスで陽性,ラットで疑陽性との結果が得られている13).
| 1) | Matsuoka, M. Hayashi and M. Ishidate Jr., Mutat. Res., 66, 277(1979). |
| 2) | 日本環境変異原学会・哺乳動物試験分科会編,"化学物質による染色体異常アトラス,"朝倉書店,東京,1988, pp.31-35. |
| 3) | E. Zeiger, B. Anderson, S. Haworth, T. Lawlor, K. Mortelmans, Environ. Mol. Mutagen, 19(suppl 21), 2(1992). |
| 4) | H. Ma, J. An, A. W. Hsie, W. W. Au, Mutat. Res., 298, 219(1993). |
| 5) | D. McGregor, Occup. Hyg., 2, 213(1996). |
| 6) | D. Anderson, A. Dhawan, T. W. Yu, M. J. Plewa, Mutat. Res., 370, 159(1996). |
| 7) | C. Osgood, S. Zimmering, J. M. Mason, Mutat. Res., 259, 147(1991). |
| 8) | J. C. Hoflack, L. Lambolez, Z. Elias, P. Vasseur, Mutat. Res., 341, 281(1995). |
| 9) | B. B, Gollapudi, E. D. Barber, T. E. Lawlor, et al., Mutat. Res., 370(1), 61(1996). |
| 10) | National Toxicology Program(NTP), NTP No. 26, NIH Publ, No. 93-3349(1993). |
| 11) | Z. Elias, M. C. Daniere, A. M. Marande, O. Poirot, F. Terzetti, O. Schneider, Occup. Hyg., 2, 187(1996). |
| 12) | T. Chiewchanwit, W. W. Au, Mutat. Res., 334, 341(1995). |
| 13) | National Toxicology Program(NTP), NTP TR 484, NIH Draft Publ, No. 98-3974(1998). |
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| 試験責任者: | 中嶋 圓 | ||
| 試験担当者: | 田中 仁,尾�蛙�也,菊池正憲,梶原玲子,鈴木ゆみ子,永井美穂,鈴木雅也 | ||
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| 〒437-1213 静岡県磐田郡福田町塩新田582-2 | |||
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| Authors: | Madoka Nakajima(Study Director) Jin Tanaka, Shinya Ozaki, Masanori Kikuchi, Reiko Kajihara, Yumiko Suzuki, Miho Nagai, Masaya Suzuki | |||
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