試験菌株として,Salmonella typhimurium(TA100,TA98,TA1535,TA1537)およびEscherichia coli(WP2 uvrA)の5菌株を用いた.用量設定試験においてはS9 mix無添加群および添加群の各試験菌株において8.19〜5000 μg/plateの8用量,本試験では313〜5000 μg/plateの5用量で試験を実施した.
その結果,S9 mix無添加群および添加群のいずれにおいても,溶媒対照に比べ復帰突然変異コロニー数の明確な増加は認められなかった.これら両試験系での試験結果は,用量設定試験および本試験において再現性が確認された.
以上の結果より,本試験条件下では2-(1-メチルエトキシ)エタノールは,変異原性を有しない(陰性)と結論した.
ネズミチフス菌は昭和58年9月9日にカリフォルニア大学のB. N. Ames教授から,また,大腸菌については昭和58年3月16日に国立衛生試験所(現:国立医薬品食品衛生研究所)から分与を受けた.平成12年10月27日に菌株の特性検査を実施し,本試験に用いた菌株が規定の特性を保持していることを確認した.
各菌株の菌懸濁液はジメチルスルホキシド(DMSO:MERCK KGaA)を添加した後,凍結保存用チューブに0.2 mLずつ分注した.これを液体窒素を用いて凍結し,超低温フリーザーに-80 ℃で保存した.
| 成分 | S9 mix 1 mL中の量 |
| S9 | 0.1 mL |
| MgCl2 | 8 μmol |
| KCl | 33 μmol |
| G-6-P | 5 μmol |
| NADPH | 4 μmol |
| NADH | 4 μmol |
| Na-リン酸緩衝液(pH 7.4) | 100 μmol |
| 蒸留水 | 残量 |
従って,本試験においてはS9 mix無添加群および添加群の各試験菌株において5000 μg/plateを最高用量とし,それぞれ5用量(公比2)を設定した.
| 2-(2-フリル)-3-(5-ニトロ-2-フリル)アクリルアミド(AF-2:和光純薬工業(株)) |
| アジ化ナトリウム(NaN3:和光純薬工業(株)) |
| 9-アミノアクリジン塩酸塩(9-AA:Aldrich社) |
| 2-アミノアントラセン(2-AA:和光純薬工業(株)) |
なお,統計学的手法を用いた検定は実施しなかった.
以上の試験結果から,本試験条件下において,2-(1-メチルエトキシ)エタノールの微生物に対する遺伝子突然変異に関し,陰性と判定した.
なお,本被験物質[2-(1-メチルエトキシ)エタノール]の変異原性に関する報告はなかった.類縁体であるIsopropyl acetateは復帰変異試験で陰性との報告があった3).
Ethylene glycol monomethyl etherは培養細胞を用いたgpt遺伝子突然変異試験で陽性との報告があるが4),McGregorによるレビューでは復帰変異試験を含めた各種遺伝毒性試験で陰性と報告している5).また,ラットを用いたコメット試験では精巣で陽性,骨髄で陰性との報告があった6).Ethylene glycol monomethyl ether acetateは復帰変異試験で弱陽性あるいは疑陽性3),ショウジョウバエを用いた異数性検出試験で陽性7)との報告があった.
Ethylene glycol monobutyl etherは復帰変異試験で陰性3)あるいは陽性8, 9),培養細胞を用いる姉妹染色分体交換試験で陰性10),培養細胞を用いる染色体異常試験で陰性10, 11),培養細胞を用いる遺伝子突然変異試験で陽性12)との報告があった.さらに,マウスならびにラット小核試験で陰性13)との報告があった.吸入暴露でのがん原性試験においてマウスで陽性,ラットで疑陽性との結果が得られている13).
| 1) | D. M. Maron and B. N. Ames, Mutat. Res., 113, 173(1983). |
| 2) | M. H. L. Green and W. J. Muriel, Mutat. Res., 38, 3(1976). |
| 3) | E. Zeiger, B. Anderson, S. Haworth, T. Lawlor, K. Mortelmans, Environ. Mol. Mutagen, 19(suppl 21), 2(1992). |
| 4) | H. Ma, J. An, A. W. Hsie, W. W. Au, Mutat. Res., 298, 219(1993). |
| 5) | D. McGregor, Occup. Hyg., 2, 213(1996). |
| 6) | D. Anderson, A. Dhawan, T. W. Yu, M. J. Plewa, Mutat. Res., 370, 159(1996). |
| 7) | C. Osgood, S. Zimmering, J. M. Mason, Mutat. Res., 259, 147(1991). |
| 8) | J. C. Hoflack, L. Lambolez, Z. Elias, P. Vasseur, Mutat. Res., 341, 281(1995). |
| 9) | B. B, Gollapudi, E. D. Barber, T. E. Lawlor, et al., Mutat. Res., 370(1), 61(1996). |
| 10) | National Toxicology Program(NTP), NTP No. 26, NIH Publ, No. 93-3349(1993). |
| 11) | Z. Elias, M. C. Daniere, A. M. Marande, O. Poirot, F. Terzetti, O. Schneider, Occup. Hyg., 2, 187(1996). |
| 12) | T. Chiewchanwit, W. W. Au, Mutat. Res., 334, 341(1995). |
| 13) | National Toxicology Program(NTP), NTP TR 484, NIH Draft Publ, No. 98-3974(1998). |
| 連絡先 | |||
| 試験責任者: | 中嶋 圓 | ||
| 試験担当者: | 田中 仁,菊池正憲,赤星まゆみ,尾�蛙�也 | ||
| (財)食品農医薬品安全性評価センター | |||
| 〒437-1213 静岡県磐田郡福田町塩新田582-2 | |||
| Tel 0538-58-1266 | Fax 0538-58-1393 | ||
| Correspondence | ||||
| Authors: | Madoka Nakajima(Study Director) Jin Tanaka, Masanori Kikuchi, Mayumi Akahoshi, Shinya Ozaki | |||
| Biosafety Research Center, Foods, Drugs and Pesticides(An-pyo Center) | ||||
| 582-2 Shioshinden, Fukude-cho, Iwata-gun, Shizuoka, 437-1213, Japan | ||||
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