検定菌として，Salmonella typhimurium TA100, TA1535, TA98, TA1537およびEscherichia coli WP2 uvrAを用い，用量設定試験では直接法が12.5〜5000 μg/プレート，代謝活性化法が50〜5000 μg/プレートの用量で，本試験では直接法が6.3〜400 μg/プレート，代謝活性化法では12.5〜800 μg/プレートの用量で試験を実施した．
その結果，２回の本試験とも，用いた５種類の検定菌について，いずれの用量でも復帰変異コロニー数の増加が認められなかったことから，1,4-ジブロモベンゼンは，用いた試験系において変異原性を有しない（陰性）と判定された．
S. typhimuriumの４菌株は1975年10月31日にアメリカ合衆国，カリフォルニア大学のB. N. Ames博士から分与を受けた．
E. coli WP2 uvrA株は1979年５月９日に国立遺伝学研究所の賀田恒夫博士から分与を受けた． 検定菌は，-80℃以下で凍結保存した．
試験に際して，ニュートリエントブロスNo.２（Oxoid）を入れたＬ字型試験管に種菌を接種し，37℃，11〜12時間往復振とう培養したものを検定菌液とした．
1,4-ジブロモベンゼンは，アセトン（ロット番号：DSR3251およびDSM4173，和光純薬工業（株））を用いて最高濃度の溶液を調製した後，同溶媒で更に希釈したものを，速やかに試験に用いた．秦野研究所において1,4-ジブロモベンゼンのアセトン溶液中での安定性試験を，本試験における最高濃度（８mg/ml）および最低濃度（16 μg/ml）の２濃度について，室温遮光条件下で実施した．その結果，調製後４時間における各３サンプルの平均含量は，それぞれ初期値（０時間）の平均に対して，102％および100％であった．
また，本試験に用いた調製検体について，含量測定試験を行った結果，8000 μg/ml溶液の含量は既定濃度に対し，100〜103％，62.5 μg/ml溶液は，104〜109％であった．
以上の結果から，1,4-ジブロモベンゼンはアセトン溶液中では安定であり，また調製液中の被験物質の含量は所定の値の範囲内にあることが確認された．
| AF-2 | ： | フリルフラマイド | （上野製薬（株）） |
| SA | ： | アジ化ナトリウム | （和光純薬工業（株）） |
| 9-AA | ： | 9-アミノアクリジン | （Sigma Chem.Co.） |
| 2-AA | ： | 2-アミノアントラセン | （和光純薬工業（株）） |
| (A) | バクトアガー（Difco） | 0.6％ |
| 塩化ナトリウム | 0.5％ | |
| (B) | * L-ヒスチジン | 0.5 mＭ |
| ビオチン | 0.5 mＭ |
| *： | WP2用には，0.5 mM L-トリプトファン水溶液を用いた． |
| 硫酸マグネシウム・7水和物 | 0.2 g |
| リン酸水素アンモニウムナトリウム・4水和物 | 3.5 g |
| クエン酸・1水和物 | ２g |
| グルコース | 20 g |
| リン酸水素二カリウム | 10 g |
| バクトアガー（Difco） | 15 g |
| S9** | 0.1 ml |
| NADH | 4 mmol |
| 塩化マグネシウム | 8 mmol |
| NADPH | 4 mmol |
| 塩化カリウム | 33 mmol |
| 0.2Mリン酸緩衝液（pH 7.4） | 0.5 ml |
| グルコース・6リン酸 | 5 mmol |
| **： | ７週齢のSprague-Dawley系雄ラットをフェノバルビタール（PB）および5,6-ベンゾフラボン（BF）の併用投与で酵素誘導して作製したS9（キッコーマン（株））を用いた． |
小試験管中にトップアガー２ml，被験物質調製液0.1 ml，リン酸緩衝液0.5 ml(代謝活性化試験においてはS9混液0.5 ml），検定菌液0.1 mlを混合したのち合成培地平板上に流して固めた．また，対照群として被験物質調製液の代わりアセトンまたは数種の陽性対照物質溶液を用いた．各検定菌ごとの陽性対照物質の名称および用量はTableに示した．培養は37℃で48時間行い，生じた変異コロニー数を算定し，それぞれその平均値と標準偏差を求めた．抗菌性の有無については，肉眼的あるいは実体顕微鏡下で，寒天表面の菌膜の状態から判断した．
以上の結果から，本試験における最高用量をすべての検定菌において，直接法では400 μg/プレート，代謝活性化法では800 μg/プレートとし，公比２で７用量（TA100のみは直接法が９用量，代謝活性化法が10用量）を設定することとした．
以上の結果に基づき，1,4-ジブロモベンゼンは，用いた試験系において変異原性を有しないもの（陰性）と判定した．
| 1) | D. M. Maron, and B. N. Ames, Mutation Research. 113, 173-215（1983）. |
| 2） | M. H. L. Green, "Handbook of Mutagenicity Test Procedures," （B. J. Kilbey, M. Legator, W. Nichols, and C. Ramel eds.） Elsevier, Amsterdam, New York, Oxford. 1984, pp.161-187. |
| 連絡先 | |||
| 試験責任者： | 澁谷 徹 | ||
| 試験担当者： | 加藤基恵，坂本京子，原 巧，石原尚古，川上久美子，松木容彦，北嶋美似子 | ||
| （財）食品薬品安全センター秦野研究所 | |||
| 〒257 神奈川県秦野市落合729-5 | |||
| Tel 0463-82-4751 | Fax 0463-82-9627 | ||
| Correspondence: | |||
| Authors: | Tohru Shibuya （Study director） Motoe Katoh, Kyoko Sakamoto, Takumi Hara, Naoko Ishihara, Kumiko Kawakami, Yasuhiko Matsuki, Miiko Kitashima | ||
| Hatano Research Institute, Food and Drug Safety Center | |||
| 729-5 Ochiai, Hadano-shi, Kanagawa, 257, Japan | |||
| Tel +81-463-82-4751 | Fax +81-463-82-9627 | ||
