2-(ジエチルアミノ)エチルメタクリラートのラットを用いる
反復経口投与毒性・生殖発生毒性併合試験

Combined Repeat Dose and Reproductive/Developmental Toxicity
Screening Test of 2-(Diethylamino)ethyl methacrylate by Oral Administration in Rats

要約

2-(ジエチルアミノ)エチルメタクリラートは，紙力増強剤，染料助剤，イオン交換樹脂および帯電防止剤の原料として広く使用されている．2-(ジエチルアミノ)エチルメタクリラートの0(対照群)，50，150および500 mg/kgの用量を雌雄ラット(SD系ラット；Crj:CD)に1日1回，雄には交配14日前から交配期間を通して剖検前日までの49日間，雌には交配14日前から交配期間，妊娠期間中および分娩後の哺育3日までの41〜54日間経口投与し，反復投与による一般毒性学的な影響を検索するとともに，雌雄動物の性腺機能，交尾行動，受胎および分娩などの生殖発生に及ぼす影響について検索した．

1.　反復投与毒性

雄の500 mg/kg群において，ヘモグロビン量，平均赤血球容積，平均赤血球血色素量および平均赤血球血色素濃度の低値，血清不飽和鉄結合能および血清総鉄結合能の高値，これに関連すると考えられる蛋白分画におけるα2-グロブリン分画比率の低値とβ-グロブリン分画比率の高値が認められた．また，尿素窒素の高値，腎臓の絶対および相対重量の高値が認められた．一般状態，体重，摂餌量，尿検査，剖検および病理組織学検査には被験物質投与の影響は認められなかった．

150 mg/kg群においては，尿素窒素の高値，腎臓の相対重量に高値が認められた．一般状態，体重，摂餌量，尿検査，血液学検査，剖検および病理組織学検査には被験物質投与の影響は認められなかった．

50 mg/kg群においては，いずれの観察，測定および検査においても被験物質投与の影響は認められなかった．

雌の各被験物質群ともに一般状態，体重，摂餌量および病理組織学検査には被験物質投与の影響は認められなかった．

2.　生殖発生毒性

親動物に関して，性周期，交尾率，受胎率，妊娠期間，分娩および哺育状態，さらには黄体数，着床痕数，着床率および出産率に被験物質投与の影響は認められなかった．しかし，500 mg/kg群において，総出産児数の低値傾向と分娩率の低値が認められた．

新生児に関して，性比，死産児数および出生率に被験物質投与の影響は認められず，外表異常児もみられなかった．また，体重推移および新生児の4日の生存率に被験物質投与の影響は認められず，生後4日における剖検においても異常は認められなかった．

以上の成績から，本試験条件下における一般毒性学的な無影響量は雄で50 mg/kg/day，雌で500 mg/kg/dayと考えられた．また，生殖発生毒性的な無影響量は雄で500 mg/kg/day，雌で150 mg/kg/day，新生児で500 mg/kg/dayと考えられた．

方法

1.　被験物質

2-(ジエチルアミノ)エチルメタクリラート［三菱ガス化学製造，Lot No. EU60907，純度99.8％，分子量185.27，比重0.92(20℃)，融点-60℃以下，沸点93.5℃(10 mmHg)］は，アミン臭のある無色液体であり，冷暗所条件下で保存した．なお，動物試験終了後に残余の被験物質を分析した結果，純度は98.5％以上であり，被験物質は安定であったことが確認された．

被験物質は，オリーブ油(日本薬局方，丸石製薬工場)に溶解し，1，3および10％(w/v)濃度に調製した．調製は1週間に1回以上の頻度で行った．調製後の被験液は，1日分ずつ褐色ガラス瓶に分注し，冷蔵・暗所条件下で保存した．本被験物質の1〜20％(w/v)液は，室温24時間保存後および冷蔵(4℃)8日間保存後更に室温24時間保存後において安定であることが確認されている．

被験液の濃度確認は，雌雄の投与開始前および雄の投与最終週の2回，各濃度液について実施した．その結果，いずれの被験液も設定濃度の95〜101％の範囲であり，ほぼ設定濃度の2-(ジエチルアミノ)エチルメタクリラートが含有されていたことを確認した．

2.　使用動物および飼育条件

試験には，日本チャールス・リバーより7週齢で購入したSprague-Dawley(Crj:CD)系SPF雌雄ラットを使用した．動物は，購入後7日間検疫・馴化飼育した後，一般状態に異常がなく，体重増加が良好な動物を8週齢で群分けして試験に使用した．群分け時の体重範囲は雄で305〜327 g，雌で201〜225 gであった．なお，雌については，検疫・馴化期間中に全動物の膣スメアを採取して，性周期に異常のない動物を試験に使用した．

動物は，温度19.5〜25.5℃，相対湿度41〜66％，換気回数1時間10〜15回，照明1日12時間(午前7時〜午後7時)の飼育室で飼育した．

動物は，交配期間および妊娠17日から哺育4日までの期間を除き，金属製網ケージ［リードエンジニアリング］に個別に収容し，飼育した．交配期間中の夕方から翌朝までの間は，金属製網ケージに雌雄各1匹の計2匹を収容した．妊娠17日の母動物は，哺育4日まで床敷として木製チップ［ホワイトフレーク:日本チャールスリバー］を入れたプラスチック製エコンケージ［日本クレア］に個別に収容し，飼育した．

飼料は，オリエンタル酵母工業のNMF固形飼料を使用し，飼料および飲料水は飼育期間中自由に摂取させた．

3.　群分け

群分けは，投与開始日に行った．動物は，雌雄とも群分け当日の体重，検疫・馴化期間中の一般状態，増体重あるいは性周期の観察結果により選択した後，群分け当日の体重で層別化し，コンピュータを用いたブロック配置法および無作為抽出法の組合せにより各群に振り分けた．1群の動物数は，雌雄各12匹とした．

4.　投与量，群構成，投与期間および投与方法

投与量は，1群雌雄各5匹のラットを用いた2週間経口投与予備試験(投与量:0，100，300および1000 mg/kg)の結果を参考にして決定した．すなわち，1000 mg/kg群の雌雄において，ヘモグロビン量の有意な低値または低値傾向，GOT，尿素窒素および肝臓重量の有意な高値，さらに雌で総蛋白質および腎臓重量の有意な高値が認められた．300 mg/kg群においては雄の肝臓重量に有意な高値が認められた．これらの結果から，本試験の高用量は，1000 mg/kgと300 mg/kgの等比中項に近似であり，毒性徴候は示すものの死亡や重篤な苦痛を示さないと推定される500 mg/kgとし，以下公比約3で除し150 mg/kgを中用量に，50 mg/kgを低用量に設定した．

投与経路は，強制経口投与とした．投与期間は，雄については交配前14日間およびその後剖検前日までの49日間，雌については交配前14日間，交配期間，妊娠期間および剖検前日の哺育3日までの41〜54日間とした．投与容量は，体重100 g当たり0.5 mLとし，個体毎の投与液量は，雄は各測定日の体重を，雌は交配前および交配期間中については各測定日の体重，妊娠期間中については妊娠0，7，14および21日の体重，哺育期間中については哺育0日の体重を基準に算出した．投与は，金属製胃ゾンデを用いて1日1回行った．対照群には溶媒として使用したオリーブ油を同様に投与した．

5.　反復投与毒性に関する観察，測定および検査

1)　一般状態

一般状態の観察は，雌雄とも試験期間を通じて毎日行った．

2)　体重

雄の体重は，投与1(投与開始日)，4，8，11，15，22，29，36，43，49および50日(剖検日)に測定した．雌の体重は，交配前については投与1，4，8，11および15日，妊娠期間中については妊娠0，7，14および21日，哺育期間中については哺育0および4日(剖検日)に測定した．

3)　摂餌量

雄の摂餌量は，交配期間と剖検日を除く体重測定と同じ日に測定した．雌の摂餌量は，交配前については体重測定と同じ日に，妊娠期間中については妊娠1，7，14および21日に，哺育期間中については哺育1および4日に測定した．摂餌量は，前日からの摂餌残量を測定し，前日の給餌量との差から1日摂取量として算出した．

4)　雄の尿検査

雄の全個体について，投与第7週(検査当日の投与後)に検査を行った．検査動物を代謝ケージに個別に収容し，絶食・自由摂水下で4時間尿を，次いで自由摂食・自由摂水下でその後の20時間尿を採取した．採取した最初の4時間尿を用いてpH，蛋白質，ケトン体，ブドウ糖，潜血，ビリルビン，ウロビリノーゲン〔以上URIFLET7A試験紙［京都第一科学］〕，色調(肉眼観察)および沈渣(鏡検)を検査した．また，その後に得られた20時間尿を用いて比重(屈折法)をアタゴ屈折計［アタゴ］により，ナトリウム，カリウム(イオン選択電極法)および塩素(電量滴定法)を全自動電解質分析装置PVA-α［アナリティカルインスツルメンツ］により測定し，4時間尿量および20時間尿量から1日の尿量を算出した．さらに，代謝ケージに収容した状態で，前日からの1日の摂水量を給水瓶を用いて測定した．

5)　雄の血液学検査

雄の全個体について，剖検日の前日より約16時間絶食させ，エーテル麻酔下で開腹し，腹大動脈より血液を採取した．この血液の一部にEDTA-2Kを加えた血液を用いて赤血球数，ヘモグロビン量，ヘマトクリット値，平均赤血球容積，平均赤血球血色素量，平均赤血球血色素濃度，血小板数および白血球数(電気抵抗変化検出法およびシアンメトヘモグロビン法)をコールター全自動8項目血球アナライザー T890［日科機］によりそれぞれ測定，算出した．また，採取した血液の一部に3.8％クエン酸ナトリウムを加え，遠心分離(3000 rpm，10分間)して得られた血漿を用いてプロトロンビン時間，活性化部分トロンボプラスチン時間およびフィブリノーゲン量(クロット法およびトロンボプラスチン法)を血液凝固自動測定装置ACL100［Instrumentation Laboratory］により測定した．さらに，採取した血液を用いてMay-Giemsa染色塗抹標本の観察により白血球百分率を，Brecher法による超生体染色標本の観察により網赤血球率を算出した．

6)　雄の血液生化学検査

雄の全個体について，血液学検査のための採血時に腹大動脈から採取したヘパリン処理血液を遠心分離(3000 rpm，10分間)して得られた血漿を用いてGOT，GPT，LDH(UV-rate法)，γ-GTP(γ-グルタミル-3-カルボキシ-4-ニトロアニリド法)，血漿コリンエステラーゼ(DTNB法)を，また，血清を用いてAlP(Bessey-Lowry法)，総コレステロール(CEH-COD-POD法)，トリグリセライド(GK-GPO-POD法)，リン脂質(PLD-ChOD-POD法)，鉄および総鉄結合能(クロマズロールB法)，不飽和鉄結合能(鉄および総鉄結合能から算出)，総ビリルビン(アゾビリルビン法)，血糖(Hexokinase-G6PD法)，尿素窒素(Urease-GLDH法)，クレアチニン(Jaff法)，ナトリウム，カリウムおよび塩素(イオン選択電極法)，カルシウム(OCPC法)，無機リン(モリブデン酸法)，総蛋白質(Biuret法)を，ヘパリンを加えた血漿を用いて全血コリンエステラーゼ(DTNB法)赤血球コリンエステラーゼ(全血および血漿コリンエステラーゼの値より算出)を全自動分析装置Monarch［Instrumentation Laboratory］により測定した．また，蛋白質分画(セルロースアセテート膜による電気泳動法)を全自動電気泳動装置CLINISCAN SA-V［ヘレナ研究所］により測定し，蛋白質分画比率からA/G比を算出した．

7)　病理学検査

剖検は，雄については最終投与の翌日に，雌については哺育4日にエーテル麻酔下で放血致死させた後，内部器官および組織を肉眼的に観察した．さらに，脳，下垂体，甲状腺(上皮小体を含む)，心臓，肺(気管支を含む)，胸腺，肝臓，腎臓，副腎，脾臓，精巣，精巣上体，精嚢および前立腺あるいは卵巣，子宮を摘出し，重量を測定し，最終体重から相対器官重量を算出した．両側性の器官については左右の合計値で評価した．これら器官に加えて，坐骨神経，胃，十二指腸，空腸，回腸，盲腸，結腸，直腸，膵臓，腸間膜リンパ節，頸部リンパ節，膀胱，乳腺，皮膚，腟，胸骨と大腿骨を含む骨髄を摘出し，リン酸緩衝液(1/15 M，pH 7.1〜7.4)で調製した10％ホルマリン液(精巣および精巣上体はブアン液)に固定した．なお，不妊動物，哺育児全例が死亡した雌および対照群雄の死亡動物についても同様に処置した．

病理組織学検査は，雌雄とも対照群および500 mg/kg群の剖検時に摘出した器官・組織ならびに剖検時の肉眼的異常部位について，常法に従ってヘマトキシリン・エオジン染色を行い鏡検した．

6.　生殖発生毒性に関する観察，測定および検査

1)　性周期観察および交配

性周期の観察は，投与開始翌日から交尾が確認されるまで毎日腟スメアを採取し鏡検し，発情期像発現回数および発情期から次の発情期までの日数を性周期として算出した．

交配は，交配前14日間性周期の観察を行った雌を同一群内の雄と1対1の組み合わせで終夜同居させた．同居期間は最長14日間とし，交尾が確認されるまでとした．交尾の確認は，毎朝腟栓形成あるいは腟垢中の精子の有無により行い，これらが確認された日を妊娠0日とした．交配結果から，交尾率［(交尾動物数／交配動物数)×100］，受胎率［(受胎動物数／交尾確認動物数)×100］および交尾までに要した同居日数を求めた．

2)　分娩および哺育状態の観察

分娩観察は，交尾が確認された雌全例を自然分娩させて行った．分娩終了の確認は，妊娠21日から24日まで毎日午前，午後の2回，妊娠25日は午前1回行い，分娩が午前10時30分の時点で終了していた場合その日を哺育0日とし，午前10時30分以降に分娩が終了した場合はその翌日を哺育0日とした．妊娠25日においても分娩が確認されなかった動物は剖検し，妊娠の成否を確認した．

哺育状態の観察は，分娩終了が確認された母動物に生存児を哺育させ，哺育4日まで毎日行った．これらの観察結果から，妊娠期間［哺育0日(分娩確認日)-妊娠0日］，出産率［(生児出産雌数／受胎動物数)×100］，着床率［(着床痕数／黄体数)×100］，分娩率［(総出産児数／着床痕数)×100］を算出した．

7.　新生児の観察，測定および検査

1)　新生児の観察

哺育0日に生存児数および死産児数を数え，性別および外表異常の有無を検査した．生存児は全例を母動物に哺育させ，生死の観察を毎日1回行った．これらの観察結果から，性比(雄／雌)，出生率［(哺育0日の生存児数／総出産児数)×100］，新生児の4日の生存率［(哺育4日の生存児数／哺育0日の生存児数)×100］を算出した．

2)　体重

体重は，哺育0および4日に測定し，1腹毎に雌雄の平均値を算出した．

3)　剖検

哺育4日に生存児全例をエーテル麻酔下で放血致死させ剖検し，内部器官の異常の有無を観察した．

8.　統計解析

体重，摂餌量，発情期像発現回数，性周期，同居日数，妊娠期間，尿検査値，血液学および血液生化学検査値，器官重量(相対重量を含む)，黄体数，着床痕数，生存児数，着床率，性比，分娩率，出生率および新生児の4日の生存率については，まずBartlett法により各群の分散の均一性の検定を行い，分散が均一の場合は一元配置法による分散分析を行い，群間に有意差が認められた場合，Dunnett法を用いて対照群と各被験物質群との一対比較検定を行った．分散が均一でない場合は，Kruskal-Wallisの順位検定を行い，有意であれば対照群と各被験物質群との平均順位の差について，Dunnett型の検定を行った．交尾率，受胎率および出産率についてはχ^2検定を行った．また，病理組織学検査の成績についてはMann-WhitenyのU検定を行った．ただし，膵臓の腺房における限局性好塩基性化および肺の骨化生については，Fisherの直接確率検定法を行った．有意水準は5および1％とした．なお，新生児に関するデータは1腹の平均を1標本とした．

結果

1.　反復投与毒性

1)　死亡動物

対照群の雄1例が投与50日(最終投与の翌日:剖検日)に死亡した．本例は死亡前日まで一般状態，体重，摂餌量および尿検査に異常はなく，剖検および病理組織学検査にも死因を示唆する変化は認められなかった．

2)　生存動物の一般状態

対照群および各被験物質群の雌雄ともに異常はみられなかった．

3)　体重および摂餌量(Fig. 1〜4)

各被験物質群雌雄の体重および摂餌量は投与期間を通じて対照群と同様の推移を示し，被験物質投与の影響は認められなかった．

4)　雄の尿検査，血液学検査および血液生化学検査(Table 1，2)

尿検査では，500 mg/kg群でナトリウム，カリウムおよび塩素の1日排泄量の有意な高値が認められた．しかし，摂餌量の増加はなく，副腎および腎臓の病理組織学検査に被験物質投与の影響はみられず，かつ血中電解質にも異常がないことから，毒性学的な意義はないと考えられた．

血液学検査では，500 mg/kg群においてヘモグロビン量，平均赤血球容積，平均赤血球血色素量および平均赤血球血色素濃度の有意な低値が認められた．その他，150 mg/kg群で平均赤血球血色素量の有意な低値，50 mg/kg群で平均赤血球容積および平均赤血球血色素量の有意な低値が認められたが，その程度および他の赤血球系パラメーターは対照群とほぼ同様の値を示したことから，50および150 mg/kg群の変動は毒性学的意義はないものと判断した．

血液生化学検査では，50 mg/kg群でα2-グロブリン分画比率の有意な低値，150 mg/kg群で尿素窒素の有意な高値およびα2-グロブリン分画比率の有意な低値，500 mg/kg群では150 mg/kg群の変化がさらに増強してみられた他，GOT活性の有意な高値，血清総鉄結合能，血清不飽和鉄結合能およびβ-グロブリン分画比率の有意な高値が認められた．その他，150 mg/kg群でA/G比およびアルブミン分画比率の有意な高値が認められたが，用量との関連性はなかった．

5)　剖検所見

雄では，腺胃の暗赤色点が対照群および各被験物質群に1〜3例，精巣の軟化(片側性)および精巣上体の小型化(片側性)が対照群に1例みられたが病変の程度および発現状況から，被験物質との関連はないと考えられた．雌ではいずれの動物にも異常はみられなかった．

6)　器官重量(Table 3，4)

雄では500 mg/kg群で肝臓の絶対重量の高値傾向と相対重量の有意な高値，腎臓の絶対および相対重量の有意な高値，150 mg/kg群で腎臓の相対重量の有意な高値が認められた．その他，50 mg/kg群で腎臓の絶対重量の有意な高値が認められたが，用量との関連はなく，血液生化学検査および病理組織学検査に異常がないことから毒性学意義はないと判断した．

雌では，500 mg/kg群で肝臓および副腎の絶対重量の低値傾向と相対重量の有意な低値が認められた．しかし，肝臓重量の低値については雄と逆の変化であり，副腎重量の低値についても雄に同様の変化はみられないこと，さらに両器官とも組織学的に異常が認められないことから，これら器官重量の変化は，毒性学的な意義はないと考えられた．

7)　病理組織学検査(Table 5，6)

心筋の変性／線維化，肺胞内における泡沫細胞集簇，肺における骨化生，腺胃の糜爛，肝臓における局限性懐死と小肉芽腫，膵臓の腺房の局限性好塩基性化と限局性萎縮，脾臓における髄外造血と赤脾髄における褐色色素沈着，尿細管の好塩基性化，腎臓の間質に細胞浸潤，尿細管上皮の好酸性小体沈着，硝子円柱，腎乳頭の限局性線維化，腎髄質における嚢胞，精巣における精子停留，精細管萎縮，精巣上体の管腔内における精子減少と細胞残屑，前立腺の間質に細胞浸潤が対照群あるいは500 mg/kg群にみられたが，投与量の増加に伴う発現頻度の増加と程度の増強が認められないことから，すべて被験物質投与との関連はないものと考えられた．また，肉眼的異常部位についても病理組織学検査を行ったが，被験物質投与との関連を示唆する変化は認められなかった．

2.　生殖発生毒性

1)　生殖機能(Table 7)

各被験物質投与群における性周期，すなわち観察期間中における発情期像発現回数および発情期から次の発情期までの日数は対照群とほぼ同等で有意差は認められなかった．交配成績については，被験物質投与群のすべての組み合わせが同居開始後5日以内に交尾し，交尾率は100％であった．また，交尾までに要した日数にも有意な差は認められなかった．さらに，各被験物質投与群の受胎率は対照群との間に有意差は認められなかった．

2)　分娩および哺育状態(Table 8)

不妊例を除く各被験物質投与群のいずれの例も妊娠23日までに分娩終了が確認され，分娩異常はみられなかった．また，被験物質投与群における妊娠期間，黄体数，着床痕数，着床率，出生率および出産率は対照群と同等で有意差は認められなかった．しかし，500 mg/kg群で総出産児数の低値傾向がみられ，分娩率に有意な低値が認められた．

哺育状態では，各群いずれの例においても巣作り，児集めおよび授乳などの哺育行動に異常は認められなかった．

3)　新生児の形態観察，生存性，体重および剖検所見(Table 9)

新生児の外表検査では500 mg/kg群で痕跡尾が1例みられたが，発現状況から自然発生によるものと考えられた．被験物質投与群における性比および生存児数は対照群との間に有意差は認められなかった．また，哺育0および4日の体重，新生児の4日の生存率は各群ともに同等の値を示し，対照群と各被験物質投与群の間に有意差は認められなかった．哺育4日の剖検では，いずれの例においても異常はみられなかった．

考察

1.　反復投与毒性

雄の一般毒性学的な影響に関して，一般状態，体重，摂餌量，尿検査，剖検および病理組織学検査に被験物質投与の影響は認められなかった．

血液学検査では，500 mg/kg群でヘモグロビン量，平均赤血球容積，平均赤血球血色素量および平均赤血球血色素濃度の低値が認められ，血清不飽和鉄結合能および血清総鉄結合能の高値が認められたことから，骨髄などにおける血色素の合成に被験物質投与の影響が示唆された．しかし，この鉄欠乏性貧血については，網状赤血球の増加はみられず，脾臓および骨髄に組織学的な異常は認められないことから，軽度な変化と考えられた．血液化学検査では，500 mg/kg群でGOT活性の高値，肝臓の絶対重量に高値傾向と相対重量に高値が認められたが，その他の検査項目には異常は認められず，組織学的にも重量の変動を示唆する変化はみられなかった．また，150および500 mg/kg群で尿素窒素がわずかに上昇し，150 mg/kg群で腎臓の相対重量の高値，500 mg/kg群で腎臓の絶対および相対重量の高値が認められたが，膀胱および腎臓に閉塞や糸球体および尿細管に尿の排泄障害を示唆する変化がみられず，組織学的にも重量の変動を示唆する異常が認められなかった．さらに，500 mg/kg群でα2-グロブリン分画比率の低値，β-グロブリン分画比率の高値が認められた．α2-グロブリン分画比率の低値については，肝臓に組織学的な障害がみられないこと，ヘモグロビン量が低値であることからヘモグロビンと結合するα2領域のハプトグロビンの低値に起因する変化と推測された．β-グロブリン分画比率の高値は血清不飽和鉄結合能が増加していることから，血清中の鉄と結合するβ領域のトランスフェリンの増加に起因する変化と推測された．その他，50および150 mg/kg群でもα2-グロブリン分画比率に低値が認められたが，変動幅は少なく，ヘモグロビン量およびβ-グロブリン分画比率にも異常がないことから毒性学的な意義はないものと判断した．

雌の一般毒性学的な影響に関しては，500 mg/kg群においてもいずれの観察，測定および検査に被験物質投与の影響は認められなかった．

以上の如く，雄の150 mg/kg群で尿素窒素の高値および腎臓の相対重量の高値，500 mg/kg群で尿素窒素の高値，腎臓の絶対および相対重量の高値，ヘモグロビン量，平均赤血球容積，平均赤血球血色素量および平均赤血球血色素濃度の低値，血清総鉄結合能および血清不飽和鉄結合能の高値，これに関連すると考えられるα2-グロブリン分画比率の低値ならびにβ-グロブリン分画比率の高値が認められた．雌の各被験物質群とも被験物質投与の影響は認められなかった．

したがって，本試験条件下における2-(ジエチルアミノ)エチルメタクリラートの一般毒性学的な無毒性量は，雄で50 mg/kg/day，雌で500 mg/kg/dayであると判断された．

2.　生殖発生毒性

500 mg/kg群においても性周期，交尾までに要した日数，交尾率および受胎率に及ぼす被験物質投与の影響は認められなかった．また，精巣および精巣上体に組織学的な変化は認められず，精子の発生および発育に対する精巣毒性もないと考えられた．雌動物では，妊娠期間および分娩に異常は認められず，黄体数，着床痕数，着床率，出産率および出生率にも被験物質投与の影響は認められなかった．さらに，分娩後の哺育行動にも異常は認められなかった．しかし，500 mg/kg群で総出産児数の低値傾向がみられ，分娩率に低値が認められた．本変化は着床痕数に異常がないことから胚・胎児の胎生期の死亡が示唆された．

新生児に及ぼす影響に関して，500 mg/kg群においても外表検査，性比，死産児数および出生率に被験物質投与の影響は認められなかった．また，体重推移および新生児の4日の生存率に被験物質投与による影響は認められず，剖検においても異常はみられなかった．

以上の如く，雌雄親動物の生殖能力に関しては，500 mg/kg群で総出産児数の低値傾向と分娩率の低値が認められた．新生児の発生および生後の発育に関しては，500 mg/kg群においても被験物質投与の影響は認められなかった．したがって，本試験条件下における親動物の生殖能力に関する無毒性量は雄で500 mg/kg/day，雌で150 mg/kg/day，新生児の無毒性量は500 mg/kg/dayと判断された．

連絡先
試験責任者：石田茂
試験担当者：片平勝也，小川順子，畠山和久，田村一利，津田敏治，勝亦倶慶
ボゾリサーチセンター　御殿場研究所
〒412-0039　静岡県御殿場市かまど1284
Tel 0550-82-9912Fax 0550-82-9913

Correspondence
Authors:Shigeru Ishida(Study director)
Katsuya Katahira, Junko Ogawa
Kazuhisa Hatayama, Kazutosi Tamura,
Toshiharu Tsuda, Tomoyoshi Katsumata
Bozo Research Center Inc. Gotemba Laboratory
1284 Kamado, Gotemba-shi, Shizuoka-ken, 412-0039, Japan
Tel +81-550-82-9912Fax +81-550-82-9913