2,4,6-トリニトロフェノールのラットを用いる単回経口投与毒性試験

Single Dose Oral Toxicity Test of 2,4,6-Trinitrophenol in Rats

要約

2,4,6-トリニトロフェノールは，火薬，花火，農薬，染料の原料である1)．今回，2,4,6-トリニトロフェノールを1群あたり5匹/性のSD系ラットに1回経口投与し，その急性毒性を検討した．投与用量は雌雄ともに0，200，400および800 mg/kg，さらに雌には100 mg/kgを設定した．

その結果，200 mg/kg群の雌1例，400 mg/kg群の雄1例，雌4例，800 mg/kg群の雌雄全例が投与日に死亡した．死亡動物では，一般状態観察において，200 mg/kg群の雌に着色尿(濃黄色)，皮膚の着色(黄色)および歩行異常，400 mg/kg群の雄に着色尿(濃黄色)および歩行異常，400 mg/kg群の雌および800 mg/kg群の雌雄に自発運動の低下，歩行異常，間代性けいれん，着色尿(濃黄色)，皮膚の着色(黄色)，腹臥位あるいは側臥位，800 mg/kg群の雄に紅涙，雌に軟便が認められた．剖検においては，腺胃壁の硬固が400および800 mg/kg群の雌雄，腺胃の出血が200 mg/kg群の雌，400および800 mg/kg群の雌雄，腺胃壁の肥厚が800 mg/kg群の雌，全身の黄色化が全死亡例に認められた．

生存動物では，全被験物質投与群に着色尿(濃黄色)，被毛の着色(黄色)，400 mg/kg群の雌雄に自発運動の低下，歩行異常および皮膚の着色(黄色)，400 mg/kg群の雄に間代性けいれん，軟便および下腹部の汚れが認められた．体重では，いずれの被験物質投与群も対照群と同様に推移した．剖検では，全被験物質投与群に被毛の着色(黄色)が認められた．

2,4,6-トリニトロフェノールを雌雄のラットに1回経口投与した結果，半数致死量(LD50値)は，雄では492 mg/kg(95 %信頼限界 375〜646 mg/kg)，雌では283 mg/kg(95 %信頼限界 168〜478 mg/kg)と結論した．

方法

1.　被験物質

三井化学(株)(東京)から提供された2,4,6-トリニトロフェノール(ロット番号8802403，純度81.4 %)を冷所，遮光，通風，換気条件下で保存し使用した．被験物質の安定性は，被験物質提供者より保証する資料を入手し，確認した．

被験物質を0.1 % Tween 80添加0.5 % CMC-Na水溶液(Tween 80 東京化成工業(株)，CMC-Na 岩井化学薬品(株))に懸濁あるいは溶解調製した．なお，調製時には被験物質の純度換算を行った．100 mg/kg群の投与液の調製は投与3日前，それ以外については投与日に行った．投与液中の被験物質が0.1から200 mg/mLの範囲で均一であること，室温保存条件下で0.1から10 mg/mLの範囲で8日間，200 mg/mLまでは4日間安定であることを確認した．また，各用量群の投与液を分析し，被験物質の濃度が設定濃度± 10 %以内であることを確認した．

2.　試験動物および動物飼育

日本チャールス・リバー(株)からCrj:CD(SD)IGSラット(SPF)を入手し，5日間検疫・馴化した．1群の動物数は雌雄各5匹とし，投与前日に各群の体重がほぼ均一となるように群分けした．投与日の週齢は5週齢，体重範囲は雄が120〜128 g，雌が101〜117 gであった．

検疫・馴化期間を含む全飼育期間を通して，温度22 ± 2 ℃(目標値)，相対湿度55 ± 15 %(目標値)，換気約12回/時(オールフレッシュエアー供給)，照明12時間/日(7:00-19:00)に自動調節した飼育室を使用した．動物は，実験動物用床敷(ベータチップ，日本チャールス・リバー(株))を敷いたポリカーボネート製ケージに，群分け前はケージあたり5匹以下(同性)，群分け後はケージあたり5匹(同性)収容し，飼育した．動物には，実験動物用固型飼料(MF,オリエンタル酵母工業(株))と，5 μmのフィルター濾過後，紫外線照射した水道水を自由に摂取させた．

3.　投与量および投与方法

予備試験として，被験物質を50，200，800 mg/kgの用量で1群雌雄各3匹のSD系ラットに1回経口投与し，投与後7日間観察した．その結果，800 mg/kg群の雌雄全例が死亡し，50および200 mg/kg群では，重篤な変化はみられなかった．このため，本試験の用量は雌雄ともに800 mg/kgを最高用量とし，以下公比2で400および200 mg/kgの3用量および溶媒のみを投与する対照群を設けた．しかし，本試験において200 mg/kg群の雌1例が死亡したため，雌についてさらに100 mg/kgの用量を追加した．投与前日より約18時間絶食させたラットに胃ゾンデを装着したシリンジを用いて1回強制経口投与し，投与後約3時間は飼料を与えなかった．投与液量は10 mL/kgとし，投与直前の体重に基づいて算出した．

4.　観察および検査方法

下記の項目を検査した．なお，日の表記は投与日を第1日とした．

1)　一般状態および体重

一般状態の観察は，投与日には15，30分，1，3および6時間の5回，以後は1日1回14日間にわたって行った．生存動物の体重は，投与直前，第4，8および15日に測定した．

2)　病理学検査

観察終了後(第15日)に生存動物をチオペンタール・ナトリウムによる麻酔下で腹大動脈を切断・放血し，安楽死させた後剖検した．また，死亡動物については発見後速やかに剖検した．

5.　半数致死量(LD50値)の算出

観察終了時の死亡率から雄についてはVan der Waerden法で，雌についてはProbit法で算出した．

結果

1.　死亡およびLD50値(Table 1)

200 mg/kg群の雌1例，400 mg/kg群の雄1例，雌4例，800 mg/kg群の雌雄全例が投与日に死亡した．LD50値は，雄では492 mg/kg(95 %信頼限界 375〜646 mg/kg)，雌では283 mg/kg(95 %信頼限界 168〜478 mg/kg)であった．

2.　一般状態

死亡動物では，200 mg/kg群の雌に着色尿(濃黄色)，皮膚の着色(黄色)および歩行異常，400 mg/kg群の雄に着色尿(濃黄色)および歩行異常，400 mg/kg群の雌および800 mg/kg群の雌雄に自発運動の低下，歩行異常，間代性けいれん，着色尿(濃黄色)，皮膚の着色(黄色)，腹臥位あるいは側臥位が認められた．この他，800 mg/kg群では雄に紅涙，雌に軟便がみられた．

生存動物では，投与日に全被験物質投与群に着色尿(濃黄色)，400 mg/kg群の雌雄に自発運動の低下，歩行異常，着色尿(濃黄色)および皮膚の着色(黄色)，400 mg/kg群の雄に間代性けいれん，軟便および下腹部の汚れが認められた．これらの症状のうち，着色尿は200 mg/kg群の雌と400 mg/kg群の雄，歩行異常は400 mg/kg群の雌で第2日までみられた．第3日から第9日までは異常はみられなかったが，第10日以降には被毛の着色(黄色)が全被験物質投与群でみられた．

3.　体重

生存動物の体重は対照群とほぼ同様に増加した．

4.　剖検所見

死亡動物では，腺胃壁の硬固が400 mg/kg群の雄1例，雌2例，800 mg/kg群の雄全例，雌4例，腺胃の出血が200 mg/kg群の雌1例，400 mg/kg群の雄1例，雌4例，800 mg/kg群の雄全例，雌4例，腺胃壁の肥厚が800 mg/kg群の雌1例，全身の黄色化が全例に認められた．

生存動物では，被験物質投与群の全例に被毛の着色(黄色)が認められた．

考察

2,4,6-トリニトロフェノールを雌雄のラットに0，200，400および800 mg/kgの用量，さらに雌には100 mg/kgの用量で1回経口投与した．その結果，主な毒性変化として200 mg/kg以上の用量群で歩行異常，400 mg/kg以上の用量群で自発運動の低下および間代性けいれんがみられ，200 mg/kg以上の用量群では死亡が発現した．また，死亡動物では腺胃に変化が認められた．

本被験物質のLD50値は，雄では492 mg/kg(95 %信頼限界 375〜646 mg/kg)，雌では283 mg/kg(95 %信頼限界 168〜478 mg/kg)と結論した．

文献

1)化学工業日報社編，“12093の化学商品，”化学工業日報社，東京，1993, p.271.

連絡先
試験責任者：山下弘太郎
試験担当者：伊勢記代子，鈴木美江
(株)三菱化学安全科学研究所　鹿島研究所
〒314-0255　茨城県鹿島郡波崎町砂山14
Tel 0479-46-2871Fax 0479-46-2874

Correspondence
Authors:Kotaro Yamashita(Study director)
Kiyoko Ise, Yoshie Suzuki
Kashima Laboratory, Mitsubishi Chemical Safety Institute Ltd.
14 Sunayama, Hasaki-machi, Kashima-gun, Ibaraki, 314-0255, Japan.
Tel +81-479-46-2871Fax +81-479-46-2874