1,3,5-トリス(2-ヒドロキシエチル)-1,3,5-トリアジン-2,4,6-(1H,3H,5H)-トリオンの
ラットを用いる単回経口投与毒性試験

Single Dose Oral Toxicity Test
of 1,3,5-Tris(2-hydroxyethyl)-1,3,5-triazine-2,4,6-(1H,3H,5H)-trione in Rats

要約

1,3,5-トリス(2-ヒドロキシエチル)-1,3,5-トリアジン-2,4,6-(1H,3H,5H)-トリオンを雌雄ラットに1回経口投与し，その毒性について検討した．投与量は2000 mg/kgを高用量とし，以下1000および500 mg/kgとした．対照として媒体(注射用水)投与群を設けた．各群の使用動物数は雌雄各5例とした．

死亡例は，いずれの群にも認められなかった．一般状態，体重および剖検所見において，雌雄とも投与による変化はみられなかった．

1,3,5-トリス(2-ヒドロキシエチル)-1,3,5-トリアジン-2,4,6-(1H,3H,5H)-トリオンのLD50値は，雌雄とも2000 mg/kg以上と考えられる．

方法

1.　被験物質および媒体

被験物質の1,3,5-トリス(2-ヒドロキシエチル)-1,3,5-トリアジン-2,4,6-(1H,3H,5H)-トリオンは，非揮発性白色結晶粉末である[Lot No.00915-1，純度:99.0 %，日産化学工業(株)(東京)]．入手後は，室温・遮光条件下で保管した．

被験物質は，注射用水で溶解して調製した．なお，2，20および200 mg/mLの調製液は，室温・遮光条件下で7日間保存しても安定性に問題のないことを確認している．投与に使用した各投与検体中の被験物質濃度を測定した結果，被験物質濃度に問題はなかった．

2.　使用動物および飼育条件

4週齢のSprague-Dawley系雌雄ラット[SPF, Crj:CD(SD)IGS]を日本チャールス・リバー(株)から購入した．入手した動物は，5日間の検疫期間およびその後2日間の馴化期間を設け，一般状態および体重推移に異常の認められなかった動物を群分けした．群分けは，コンピュータを用いて体重を層別に分けた後に，無作為抽出法により各群の平均体重および分散がほぼ等しくなるように投与日に行った．

動物は，室温20〜26 ℃，湿度40〜70 %，明暗各12時間(照明:午前6時〜午後6時)，換気回数12回/時に維持されている飼育室で飼育した．検疫・馴化期間中および群分け前の絶食時間中はステンレス製ケージを用いて1ケージ当たり5匹までの雌雄別群飼育とし，群分け後はステンレス製ケージを用いて個別飼育した．飼料は，固型飼料(CRF-1，オリエンタル酵母工業(株))を自由に摂取させた．ただし，投与前日の夕刻から投与までの約20時間と投与後約6時間まで絶食させた．飲料水は，水道水を自由に摂取させた．ただし，群分け時から投与後約6時間までは絶水させた．

3.　投与経路，投与方法および投与量

投与経路は経口投与を選択した．投与に際しては，金属製経口胃ゾンデを取り付けたポリプロピレン製ディスポーザブル注射筒を用いて，強制経口投与した．投与液量は，投与直前に測定した体重を基準として10 mL/kgで算出した．投与回数は1回とした．投与日の週齢は5週齢であり，体重範囲は雄が104〜113 g，雌が95〜101 gであった．

1,3,5-トリス(2-ヒドロキシエチル)-1,3,5-トリアジン-2,4,6-(1H,3H,5H)-トリオンのラット経口投与時のLD50値は10000 mg/kg以上との報告がある1)．そこで，当試験では，2000 mg/kgを高用量とし，以下公比2により1000および500 mg/kg群を設定した．また，対照として媒体(注射用水)のみを同容量投与する群を設けた．1群の動物数は，雌雄それぞれ5例とした．

4.　観察および検査項目

1)　観察期間

投与後14日間とした．

2)　一般状態

投与日は投与前および投与後6時間(投与後30分まで，投与後2，4および6時間)まで，投与翌日からの観察期間中は1日1回，一般状態および死亡の有無を観察した．

3)　体重測定

投与日および投与後1，3，7，10ならびに14日に測定した．

4)　剖検

観察期間終了時にエーテル麻酔下で腹大動脈から放血致死させた後に剖検した．

5.　統計解析

当試験では，死亡例が認められなかったことから，LD50値は概略の範囲を推定した．

体重について，Bartlett法による等分散性の検定を行い，等分散の場合には一元配置法による分散分析を行い，有意ならばDunnett法により行った．一方，等分散と認められなかった場合は，順位を利用した一元配置法による分析(Kruskal-Wallisの検定)を行い，有意ならば順位を利用したDunnett型の検定法により行った．

結果

1.　死亡状況および一般状態

いずれの群の雌雄においても，死亡例は認められなかった．

一般状態の観察において，いずれの群の雌雄とも異常はみられなかった．

2.　体重推移

各投与群の雌雄とも，対照群と比べていずれの測定日の体重にも有意差はみられなかった．

3.　剖検所見

いずれの群の雌雄においても，異常はみられなかった．

考察

1,3,5-トリス(2-ヒドロキシエチル)-1,3,5-トリアジン-2,4,6-(1H,3H,5H)-トリオンは2000 mg/kgを投与しても，雌雄ともに死亡例は認められず，LD50値は雌雄とも2000 mg/kg以上と考えられる．

文献

1)日産化学工業，未発表．

連絡先
試験責任者：古橋忠和
試験担当者：三輪芳久，牧野浩平，内藤一嘉，吉島賢一
(株)日本バイオリサーチセンター羽島研究所
〒501-6251　岐阜県羽島市福寿町間島6-104
Tel 058-392-6222Fax 058-392-1284

Correspondence
Authors:Tadakazu Furuhashi(Study director)
Yosihisa Miwa, Kohei Makino，Kazuyoshi Naito, Ken-ichi Yoshijima
Nihon Bioresearch Inc.
6-104, Majima, Fukuju-cho, Hashima, Gifu, 501-6251, Japan
Tel +81-58-392-6222Fax +81-58-392-1284