2-アミノ-1-ナフタレンスルホン酸のラットを用いる
単回経口投与毒性試験

Single Dose Oral Toxicity Test of
2-Amino-1-naphthalenesulfonic acid in Rats

要約

　既存化学物質の毒性学的性質を評価するために，2-アミノ-1-ナフタレンスルホン酸を雌雄ラットに1 回経口投与し，その毒性について検討した．投与量は2000 mg/kgを高用量とし，以下1000および500 mg/kgとした．対照として，媒体の0.5% CMC投与群を設けた．

　一般状態の観察では，2000 mg/kg群の雌雄で投与後1日に軟便が少数例に，肛門周囲の被毛の汚れが約半数例にみられた．死亡発現はなかった．体重は，各投与群の雌雄とも対照群とほぼ同様の推移を示した．剖検では，各投与群の雌雄とも著変はみられなかった．2-アミノ-1-ナフタレンスルホン酸のLD50値は，雌雄とも2000 mg/kg以上であった．

方法

1.　被験物質，媒体および投与検体液

　被験物質の2-アミノ-1-ナフタレンスルホン酸は，黄みの白色ないしごくうすい赤色の固体で，分子量：223.26，直射日光下では急速に着色し，水に難溶であるが，炭酸水素ナトリウム溶液に対する溶解状態は澄明ないしわずかに微濁する性質を有する（Lot No. 07021，製造元：スガイ化学工業(株)，純度：98.7%，規格値：98.0%以上）．投与終了後に残余被験物質の一部を製造元に送付して分析した結果，純度は 98.9%であり，使用期間中の安定性が確認された．媒体として，0.5% CMC水溶液を用いた．

　投与検体液は，被験物質を0.5% CMC 水溶液に用時懸濁して調製した．投与検体液中の被験物質濃度を，試験施設内でHPLC法により測定した．その結果，被験物質濃度は適正範囲内の値を示した．

2.　使用動物および飼育条件

　4週齢のSprague-Dawley系雌雄ラット [Crj:CD (SD), (SPF)] を日本チャールス・リバー(株)日野飼育センターから購入した．5日間の検疫期間およびその後4日間の馴化期間を設け，一般状態および体重推移に異常の認められない雌雄各20匹を群分けして試験に用いた．群分けは，体重を層別に分けた後に，無作為抽出法により各群の平均体重および分散がほぼ等しくなるように投与日に行った．

　動物は，室温20〜24℃，湿度40〜70%，明暗各12時間，換気回数12回／時に設定した飼育室で飼育した．検疫・馴化期間中および絶食期間中はステンレス製懸垂式ケージを用いて1ケージあたり5匹までの群飼育とし，群分け後はステンレス製5連ケージを用いて個別飼育した．

　飼料は，固型飼料（CRF-1，オリエンタル酵母工業(株)）を給餌器に入れ，自由に摂取させた．ただし，投与前日の夕刻から投与までの約19時間と投与後約6時間まで絶食させ，その後に飼料を与えた．飲料水は，水道水を給水瓶を用いて自由に摂取させた．ただし，群分け時から投与後約6時間までは絶水させ，その後に飲料水を与えた．飼料および飲料水の分析の結果，いずれも検査成績は試験施設で定めた基準値の範囲内であった．

3.　投与経路，投与方法，群構成および投与量

　2-アミノ-1-ナフタレンスルホン酸は，経口的に人に摂取される可能性が考えられるため，投与経路として経口投与を選択した．投与液量は，投与直前に測定した体重を基準として10 ml/kgで算出した．投与回数は1回とした．投与時の週齢は約5週齢，体重範囲は雄が110〜121 g，雌が 105〜112 gであった．

　群構成は，以下の如くとした．1群の動物数は，雌雄各 5 匹とした．

　投与量設定の理由：雄ラットを用いた投与量設定のための予備試験（投与段階：0, 20, 200および2000 mg/kg，1 群 3 匹）の結果，2000 mg/kg投与においても死亡発現はなく，一般状態，体重推移および剖検にも異常はみられなかった．そこで，当試験では2000 mg/kgを高用量とし，以下公比2で1000および500 mg/kg群を設けた．対照として，同一液量の媒体投与群を設けた．

4.　観察および検査項目

観察期間：観察期間は，投与後14日間とした．
一般状態：投与日は投与前および投与後6時間まで，投与翌日からの観察期間中は1日1回，一般状態および死亡の有無を観察した．
体重測定：投与日および投与後1, 3, 7, 10ならびに14日の午前中に体重を測定した．
剖　検：観察期間終了時に，エーテル麻酔下で腹大動脈から放血致死させた後に剖検した．

5.　統計学的方法

LD50値：観察期間中の死亡率から，概略のLD50値を推定した．
体　重：体重は，各群で平均値および標準偏差を算出した．有意差検定は対照群と被験物質投与各群の間で多重比較検定を用い，危険率5%未満を有意とした．すなわち，Bartlett法による等分散性の検定を行い，等分散の場合には一元配置法による分散分析を行い，有意ならば対照群との群間比較をDunnett法により行った．一方，等分散と認められなかった場合は順位を利用した一元配置法による分析（Kruskal-Wallisの検定）を行い，有意ならば対照群との群間比較は順位を利用したDunnett法を用いて行った．

結果および考察

1.　一般状態および死亡状況

　投与日は，投与後6時間までは対照群および各投与群の雌雄とも異常症状は観察されなかった．

　投与後1日には，2000 mg/kg群の雌雄で軟便が各1例に，肛門周囲の被毛の汚れが2〜3例にみられた．しかしながら，投与後2日以降にはいずれの群の雌雄とも異常症状は観察されなかった．

　雌雄とも，高用量の2000 mg/kgでも死亡発現はなかった．2-アミノ-1-ナフタレンスルホン酸のLD50値は，雌雄とも2000 mg/kg以上であった．

2.　体重推移

　各投与群の雌雄とも対照群とほぼ同様の推移を示し，有意差は認められなかった．

3.　剖検所見

　各群の雌雄とも，剖検で著変はみられなかった．

　以上のように，2-アミノ-1-ナフタレンスルホン酸は2000 mg/kgの投与によって，雌雄とも死亡発現はなかった．一般状態では，2000 mg/kg群の雌雄で投与後1日に軟便が少数例に，さらに軟便に伴った変化と思われる肛門周囲の被毛の汚れが約半数例に観察されたが，投与後2日には異常はみられず，軟便症状の消失は早いと考えられた．また，体重推移に異常はなく，剖検でも著変はみられなかった．

　2-アミノ-1-ナフタレンスルホン酸のLD50値は，雌雄とも2000 mg/kg以上であった．

連絡先
試験責任者：和田　浩
試験担当者：林吉一，藤村高志，吉島賢一，
牧野浩平，山本明義
(株)日本バイオリサーチセンター　羽島研究所
〒 501-62 　岐阜県羽島市福寿町間島 6-104
Tel 058-392-6222Fax 058-391-3171

Correspondence
Authors:Hiroshi Wada (Study director)
Yoshikazu Kobayashi, Takashi Fujimura,
Ken-ichi Yoshijima, Kohei Makino and
Akiyoshi Yamamoto
Nihon Bioresearch Inc. Hashima Laboratory
6-104, Majima, Fukuju-cho, Hashima, Gifu, 501-62 Japan
Tel +81-58-392-6222Fax +81-58-391-3171