1-ブロモ-3-クロロプロパンのラットを用いる28日間反復経口投与毒性試験

Twenty-eight-day Repeat Dose Oral Toxicity Test of 1-Bromo-3-chloropropane in Rats

要約

l-ブロモ-3-クロロプロパンの28日間反復経口投与毒性試験(回復14日間)を雌雄のSprague-Dawley系ラットを用いて実施した.投与量は雌雄とも0(対照群),20,100および500 mg/kgとし,0および500 mg/kg投与群は回復試験の動物を含む1群10匹,20および100 mg/kg投与群は1群5匹を使用して試験を行った.

その結果,500 mg/kg投与群の雄で投与期間中に10例中9例が死亡または切迫屠殺した.

一般状態の変化として,500 mg/kg投与群の雌雄では投与第1週から3週に,活動性の低下,閉眼あるいは半眼が散見されたが,これらの症状はいずれも投与した翌日には消失した.投与第3週以降,雌雄とも前肢の引っ掻き様常同行動がみられるようになり,雄では投与第20日以降に間代性あるいは強直性痙攣がみられ,投与第21日から25日の間に10例中4例が死亡し,5例が瀕死状態となったため切迫屠殺した.体重の変化としては,500 mg/kg投与群の雄で投与第15日以降に有意な低値となり,摂餌量も減少した.血液学検査では,100 mg/kg投与群の雄でヘマトクリット値の減少と平均赤血球血色素濃度の上昇が認められた.また,雌では投与期間終了時に著しい変化は認められなかったが,回復期間終了時の検査で赤血球数,血色素量およびヘマトクリット値の減少が認められた.血液生化学検査では,500 mg/kg投与群の雌でアルブミン濃度およびγ-GTP活性の上昇が認められた.器官重量では,肝臓の絶対あるいは相対重量の増加が100 mg/kg以上の投与群に,また,腎臓の絶対あるいは相対重量の増加が100 mg/kg投与群の雄および500 mg/kg投与群の雌に認められた.剖検所見としては,死亡例,切迫屠殺例および投与期間終了時の500 mg/kg投与群の一部の例に,前胃あるいは腺胃粘膜の肥厚,腺胃の暗色点が認められた.また,死亡および切迫屠殺例では,脾臓の小型化および淡色化,腎臓の大型化あるいは肺の暗色部が観察される例があった.病理組織学検査では,死亡および切迫屠殺例を含め,肝臓の小葉中心性の肝細胞肥大が100 mg/kg以上の投与群の雌雄に認められた.脳では,視床下部,視床の空胞変性が500 mg/kg投与群に観察された.脾臓では,ヘモジデリン沈着の増強が500 mg/kg投与群に認められ,死亡あるいは切迫屠殺例では,髄外造血がほとんどみられず,萎縮が観察される例があった.精巣では,精細管の萎縮が100 mg/kg以上の投与群にみられ,500 mg/kg投与群では,精巣上体管腔内の細胞残屑と精子数の減少が認められる例があった.胃では,軽微から軽度な前胃粘膜の過形成が100 mg/kg以上の投与群の雄および500 mg/kg投与群の雌にみられたほか,剖検所見で病変がみられた胃では,前胃あるいは腺胃粘膜のびらん,腺胃粘膜の出血,前胃あるいは腺胃粘膜固有層の好中球の浸潤が認められた.一方,雌の回復期間終了時の検査では,脾臓のヘモジデリン沈着がさらに増強したが,死亡例,切迫屠殺例および投与期間終了時の被験物質投与群でみられた肝臓の小葉中心性の肝細胞肥大および脳の空胞変性はいずれも観察されなかった.

以上のことから,本試験条件下におけるl-ブロモ-3- クロロプロパンの無影響量は,雌雄とも20 mg/kg/dayであると判断された.

方法

1. 被験物質

被験物質として,東ソー(株)(東京)より提供された1-ブロモ-3-クロロプロパン(ロット番号:8917T,純度:99.9 area%)を用いた.提供された被験物質は,使用時まで遮光して室温で保管した.なお,被験物質の試験期間中の安定性は,残余被験物質を提供元で再分析することにより確認した.

投与検体は,用量ごとに被験物質を秤量し,所定濃度となるようにコーン油(ロット番号:V8P7069,ナカライテスク(株)を加えて溶解して調製した.

初回に調製した各濃度の投与検体の含量測定を実施した結果,溶液中の被験物質の平均含量は,所定濃度の99.9〜102 %であった.また,動物試験に先立って,被験物質の0.4および20 w/v%溶液の安定性を調べたところ,室温,遮光条件下で10日間は安定であることが確認されたため,投与検体の調製は1週間に1回の頻度で調製し,室温,遮光下で保管した.

2. 動物および飼育方法

試験には,生後4週で購入し,検疫を兼ねて6日間予備飼育した雌雄のSprague-Dawley系ラット(Crj:CD(SD)IGS,日本チャールス・リバー(株)各30匹を使用した.

群分けは,検疫期間中に異常がなかった動物を用い,投与開始前日の体重に基づいて体重別層化無作為抽出法により行った.動物数は,雌雄とも対照群および高用量群を各10匹とし,低および中用量群を各5匹とした.

動物は,温度24 ± 1 ℃,湿度50〜65 %,換気回数約15回/時,照明12時間(7〜19時点灯)に設定した飼育室内で,金属製金網床ケージに1匹ずつ収容し,固型飼料(CE-2,日本クレア(株)および水道水(秦野市水道局給水)を自由摂取させて飼育した.

3. 投与量の設定および投与方法

本試験の投与量は,投与量設定のための予備試験の結果に基づき決定した.すなわち,雌雄のラットにl-ブロモ-3-クロロプロパンを0,125,250および500 mg/kgの用量で,7日間反復投与することにより,雌雄とも500 mg/kg投与群で,投与後に活動性の低下および閉眼などの症状が観察され,投与初期には体重の減少ないし増加抑制がみられたが,いずれの所見も悪化する傾向はなかった.以上のことから,500 mg/kgは,被験物質による毒性影響が明らかに認められ,かつ28日間の反復投与に耐えうる用量であると判断し,本試験の用量は,高用量を500 mg/kgとし,以下公比5で除して100および20 mg/kgを中用量および低用量とした.また,雌雄とも媒体であるコーン油を投与する対照群を設けた.なお,500 mg/kg投与群の雄では投与期間中に10例中9例が死亡または切迫屠殺したため,回復試験に関する報告は雌のみとする.

投与経路は強制経口投与とし,1日1回,28日間,ラット用胃管を用いて投与した.投与容量は5 mL/kgとし,投与液量は雌雄とも最近時の体重をもとに個体別に算出した.なお,雌の回復期間は14日間とした.

4. 観察および検査

1) 一般検査

毎日(投与期間中は投与前および投与後)全例の一般状態を観察した.また,体重は,投与第1週の第1日の投与直前と4日,投与第2週以降回復期間終了週までは1週に2回の頻度で測定し,その他,投与期間終了日,回復期間終了日および剖検日,ならびに死亡および切迫屠殺時にも測定した.摂餌量は,投与第1週では,投与第1日から2日にかけて1日あたりの摂餌量を測定し,以後回復期間終了週まで毎週1回の頻度で測定した.

2) 尿検査

各群とも生存している全例について,投与第4週および回復第2週に代謝ケージに収容して蓄尿し,約4時間の時点で採尿した.この4時間尿を用いて,視診により色調,濁度を,また,試験紙法(クリニテック200+,バイエル・三共(株)によりpH,潜血,蛋白,糖,ケトン体,ウロビリノーゲンおよびビリルビンを検査した.

3) 血液学検査

投与期間ないし回復期間終了日から翌日の剖検日にかけて定期解剖例全例を18から24時間絶食させ,ペントバルビタールナトリウム麻酔下で腹部後大静脈よりEDTA 2Kを抗凝固剤として採血し,Coulter Counter Model S-PLUS(コールターエレクトロニクス(株)により赤血球数,白血球数,平均赤血球容積,血小板数(以上,電気抵抗法)および血色素量(吸光度法)を測定し,これらを基にヘマトクリット値,平均赤血球血色素量および平均赤血球血色素濃度を算出した.血液の一部は塗抹標本とし,白血球分類(Wright-Giemsa染色)および網状赤血球比率(Brecher法)を求めた.また,クエン酸ナトリウムを抗凝固剤として採取した血液をCA-1000(東亜医用電子(株)によりプロトロンビン時間および活性部分トロンボプラスチン時間 (光散乱検出法)を測定した.また,切迫屠殺例でも可能な限り定期解剖例と同様の検査をした.

4) 血液生化学検査

血液学検査用の採血に引き続き,ヘパリンを抗凝固剤として採血し,血漿を分離して遠心方式生化学自動分析装置(COBAS-FARA,ロシュ・ダイアグノスティックス(株)により,総蛋白濃度(ビウレット法) ,アルブミン濃度(BCG法),総コレステロール濃度(COD・DAOS法),ブドウ糖濃度(グルコキナーゼ・G6PDH法),尿素窒素濃度(ウレアーゼ・Gl.DH法),クレアチニン濃度(Jaff法),アルカリフォスファターゼ活性(GSCC法),GOT活性(IFCC法),GPT活性(IFCC法),γ-GTP活性(γ-グルタミル-3-カルボキシ-4-ニトロアニリド基質法),トリグリセライド濃度(GPO・DAOS法),無機リン濃度(モリブデン酸直接法),カルシウム濃度(OCPC法)を測定し,A/G比を算出した.また,全自動電解質分析装置(EA05,(株)A&T)により,ナトリウム濃度,カリウム濃度および塩素濃度(イオン電極法)を測定した.

5) 病理学検査

上記の採血に引き続き,死亡例を除く全例を放血屠殺したのち,器官および組織の肉眼的観察を行った.また,各動物の脳,胸腺,心臓,肝臓,腎臓,脾臓,副腎,卵巣または精巣,精巣上体の重量測定を行い,各器官重量を剖検日の体重で除して,それぞれの相対重量を算出した.さらに,脳,下垂体,脊髄,眼球,甲状腺,上皮小体,心臓,気管,気管支,肺,肝臓,腎臓,胸腺,脾臓,副腎,胃,十二指腸,空腸,回腸,盲腸,結腸,直腸,前立腺,精嚢,卵巣,子宮,腟,乳腺,膀胱,下顎リンパ節,腸間膜リンパ節,骨格筋(下腿部),坐骨神経,大腿骨骨髄,膵臓,顎下腺,舌下腺,舌,食道,大動脈,ハーダー腺,皮膚,病変部を0.1 mol/Lリン酸緩衝10 vol%ホルマリン溶液(pH 7.2)に固定し,精巣および精巣上体をブアン液に固定した.脳,脊髄,心臓,肝臓,腎臓,脾臓,副腎,精巣,精巣上体,卵巣および病変部については,パラフィン包埋後,ヘマトキシリン・エオジン染色標本を作製し,先ず,対照群および切迫屠殺例ならびに死亡例を含む高用量群について病理組織学検査を実施した.これらの病理学検査と血液学検査の結果から,雌雄の肝臓,脳,脾臓,胃および大腿骨骨髄,雄の精巣および精巣上体に被験物質投与との関連が疑われる変化が認められたため,必要な組織標本を追加作製し,全例の病理組織学検査を実施した.さらに,脾臓については,被験物質投与群の褐色色素沈着の程度が対照群と比較して強かったことから全例のベルリンブルー染色標本を作製し,病理組織学検査を追加した.この他,肉眼的異常が認められた器官・組織についても病理組織学検査を実施した.

5. 統計解析

体重,摂餌量および定期解剖例の血液学検査,血液生化学検査ならびに器官重量について,群ごとに平均値および標準偏差を求めた.また,試験群が3群以上の場合は,Dunnett法で多重比較を行い,2群の場合には,Studentのt検定ないしAspin-Welchのt検定を行った.さらに,病理組織学検査所見は,グレード分けしたデータについてMann-WhitneyのU検定を,陽性グレードの合計値についてFisher直接確率の片側検定を行った.なお,これら対照群および被験物質投与群との間の有意差検定はいずれの場合も有意水準を5 %とした.

結果

1. 切迫屠殺例および死亡例

投与第21日から25日の間に,500 mg/kg投与群の雄10例中4例が死亡し,また,5例が瀕死状態となったため切迫屠殺した.

2. 一般状態

500 mg/kg投与群の雌雄では,投与第1週から3週に,活動性の低下,閉眼あるいは半眼が散見されたが,これらの症状はいずれも投与翌日には消失した.また,投与第3週以降に,雌雄とも前肢の引っ掻き様常同行動がみられるようになり,雄では投与第20日以降に間代性あるいは強直性痙攣がみられ,痙攣の発症した例では死亡あるいは瀕死状態となった.これらの例では,痙攣がみられるようになると腹臥位あるいは横臥位姿勢をとり,呼吸深大,過敏,削痩,被毛の汚れ,排便量の減少,立毛などの症状が付随して認められた.この他,500 mg/kg投与群では,投与期間中に流涙が散発的に観察された.これらの症状に加えて,投与期間中,100 mg/kg以上の投与群に流涎が認められた.すなわち,投与直後の流涎が,500 mg/kg投与群の雌雄全例,100 mg/kg投与群の雄3例,雌2例に認められた.500 mg/kg投与群でみられた流涎は,投与後1時間以上継続してみられることが多く,また,投与初日から観察された例をはじめ,投与期間の前半からみられ,雄2例,雌1例では投与後1時間以上経過した後に認められることもあった.一方,100 mg/kg投与群でみられた流涎は,いずれも投与後1時間以内に消失する一過性のものであった.なお,100および500 mg/kg投与群でみられた流涎は,個体によっては投与時の保定の段階でみられることがあった.さらに,500 mg/kg投与群の雌では,投与最終日から尿によると考えられる下腹部を中心とした被毛の汚れがみられ,2例では回復期間終了時まで継続して認められた.

3. 体重(Fig. 1, 2)

500 mg/kg投与群の雄では,投与第15日以降の体重が対照群と比較して有意な低値を示したが,他の被験物質投与群では,観察期間中,対照群との間に体重の有意な差は認められなかった.

4. 摂餌量(Fig. 3)

500 mg/kg投与群では,雌雄とも投与第1週の摂餌量が対照群と比較して有意な低値を示し,また,雄では投与第4週の摂餌量も有意な低値であったほか,雌では投与第3週の摂餌量が有意な高値を示した.その他の被験物質投与群では,観察期間中,対照群との間に摂餌量の有意な差は認められなかった.

5. 尿検査(Table 1)

投与第4週の検査では,500 mg/kg投与群の雌雄とも尿pHが低い傾向にあり,pH 6以下を示す例が,対照群では雌雄各10例中雌の1例であったのに対し,500 mg/kg投与群では雄3例中2例,雌10例中6例であった.また,対照群の雌1例,500 mg/kg投与群の雌2例では,尿潜血反応が陽性であった.また,回復第2週の検査では,各検査項目とも,対照群と被験物質投与群との間に著しい差は認められなかった.

6. 血液学検査(Table 2)

投与期間終了時の100 mg/kg投与群の雄では,ヘマトクリット値の有意な減少と平均赤血球血色素濃度の有意な上昇が認められた.また,平均赤血球血色素濃度は,20 mg/kg投与群の雄でも有意な上昇がみられたが,赤血球数は対照群の値を上回っていた.

一方,雌では投与期間終了時のいずれの検査項目においても,対照群と被験物質投与群の間に有意な差は認められなかったが,回復期間終了時の被験物質投与群では,赤血球数,血色素量およびヘマトクリット値の有意な減少が認められた.

投与期間中の切迫屠殺例では,血液学検査所見に一定の傾向の変化は認められなかった.

7. 血液生化学検査(Table 3)

投与期間終了時の被験物質投与群では塩素濃度が用量に依存して上昇した.すなわち,雄では20および100 mg/kg投与群,また,雌では100 mg/kg以上の投与群において塩素濃度の有意な上昇がみられ,500 mg/kg投与群の雄1例でも著しく高い値を示した.また,500 mg/kg投与群の雌では,アルブミン濃度,カリウム濃度,γ-GTP活性の有意な上昇がみられたほか,尿素窒素濃度の有意な低下が認められた.この他,100 mg/kg投与群の雄では,クレアチニン濃度の有意な低下が認められたが,用量依存的な変化ではなかった.

回復期間終了時の被験物質投与群の雌では塩素濃度の有意な上昇がみられたほか,クレアチニン濃度の有意な上昇とGPT活性の有意な低下が認められた.

投与期間中の雄の切迫屠殺例では,投与期間終了時の検査と同様に塩素濃度の著しい上昇がみられたほか,他の電解質濃度も高い傾向にあった.

8. 病理学検査

1) 肉眼所見

投与期間終了時では,腺胃粘膜の肥厚が,500 mg/kg投与群の雄1例,雌2例に,腺胃の暗色点が,500 mg/kg投与群の雌1例に認められた.また,肺の暗色点が100 mg/kg投与群の雄1例に認められた.

回復期間終了時では,卵巣の暗色点が500 mg/kg投与群の1例に認められた.

一方,投与第21日から25日の間に死亡あるいは切迫屠殺した9例のうち,4例では前胃および腺胃粘膜の肥厚が,また,他の4例では腺胃粘膜の暗色点が認められた.また,脾臓の小型化が8例,淡色化が4例に観察された.その他,腎臓の大型化と肺の暗色部がそれぞれ2例に認められた.

2) 器官重量(Table 4)

100 mg/kg投与群の雄および500 mg/kg投与群の雌では,肝臓の絶対および相対重量ともに有意な増加がみられ,100 mg/kg投与群の雌では,相対重量の有意な増加が認められた.500 mg/kg投与群の雌では,腎臓の絶対および相対重量の有意な増加がみられ,100 mg/kg投与群の雄では,絶対重量の有意な増加が認められた.この他,20 mg/kg投与群の雌では,脾臓の絶対重量に,また,500 mg/kg投与群の雌では,心臓の相対重量に,それぞれ有意な増加が認められたが,被験物質投与との関連はないものと考えられた.

回復期間終了時の被験物質投与群の雌では,脳の絶対重量に有意な減少がみられ,心臓および肝臓の相対重量に有意な増加が認められた.

投与期間中の雄の切迫屠殺例における器官重量では,肝臓および腎臓重量が増加し,脾臓重量が低値の傾向にあった以外に著しい変化は認められなかった.

3) 病理組織学検査(Table 5)

(1) 投与期間終了時解剖例

肝臓では,軽微から軽度な小葉中心性の肝細胞肥大が100 mg/kg以上の投与群の雌雄に観察された.脳では,視床下部,視床に軽微から軽度な空胞変性が500 mg/kg投与群の雄1例,雌5例に観察された.脾臓では,ヘモジデリン沈着が500 mg/kg投与群の雌で増強した.精巣では,軽微な精細管の萎縮が500 mg/kg投与群の1例,100 mg/kg投与群の2例に観察され,500 mg/kg投与群の1例では精巣上体管腔内にも細胞残屑がみられた.卵巣には異常所見は認められなかった.胃では,軽微な前胃粘膜の過形成が500 mg/kg投与群の雄1例,雌2例および100 mg/kg投与群の雄1例に認められた.この他,自然発生性の所見が観察されたが,いずれも対照群と比較してその程度あるいは頻度に有意差のある変化ではなかった.なお,肉眼的に病変がみられた部位の所見として,腺胃粘膜の肥厚が観察された500 mg/kg投与群の雄1例,雌2例のうち,雌2例では腺胃の粘膜固有層に好中球の浸潤が認められ,腺胃の暗色点が観察された500 mg/kg投与群の雌1例では,腺胃粘膜の出血が観察された.また,肺の暗色点が観察された100 mg/kg投与群の雄1例では,この部に一致して肺胞の限局性出血がみられた.他の病変部には異常は認められなかった.

(2) 回復期間終了時解剖例

脾臓では,被験物質投与群にヘモジデリン沈着の増強が認められた.また,肉眼的に病変がみられた部位の所見として,卵巣の暗色点が観察された被験物質投与群の1例では,黄体の軽微な出血が観察された.なお,投与期間終了時に被験物質投与群でみられた肝臓の小葉中心性の肝細胞肥大および脳の空胞変性は,回復期間終了時の検査ではいずれも観察されなかった.

(3) 死亡例および切迫屠殺例

肝臓では,軽微から軽度な小葉中心性の肝細胞肥大が8例に,また,軽微な門脈周囲性の脂肪化が5例に認められた.脳では,視床下部,視床の軽微から軽度な空胞変性が7例に観察された.脾臓では,軽度な萎縮が3例にみられ,軽微から軽度のヘモジデリン沈着が8例に認められたほか,髄外造血は1例を除き認められなかった.精巣では,精細管の萎縮が8例にみられ,その程度は中等度1例,軽微7例であった.精巣上体では,管腔内の細胞残屑が全例にみられたほか,精子数の減少が2例に認められた.胃では,軽微から軽度な前胃粘膜の過形成が8例に観察されたほか,前胃あるいは腺胃粘膜のびらんが3例,前胃粘膜固有層の好中球浸潤が1例,腺胃粘膜固有層の好中球浸潤が6例にみられ,肉眼的に肺の暗色部がみられた2例中1例では肺水腫が認められた.

考察

l-ブロモ-3-クロロプロパンをコーン油に溶解して,20,100および500 mg/kgの用量で雌雄のSprague-Dawley系ラットに28日間にわたって強制経口投与し,その後14日間の回復期間を設けた.

その結果,主として脳,肝臓,精巣および造血系で被験物質投与に起因したと考えられる毒性変化が生じ,500 mg/kg投与群の雄には死亡例がみられた.すなわち,500 mg/kg投与群の雌雄では,投与期間の前半に,活動性の低下,閉眼あるいは半眼が散見され,その後,前肢の引っ掻き様常同行動がみられるようになり,雄では投与第20日以降,間代性あるいは強直性痙攣がみられ,痙攣の発症した例では死亡あるいは瀕死状態となった.この他,投与期間中に,100 mg/kg以上の投与群では流涎が,また,500 mg/kg投与群では流涙が観察され,特に500mg/kg投与群の流涎は,投与後1時間以上継続してみられる例が多かった.これらの所見に関連した変化として,500 mg/kg投与群では,死亡あるいは切迫屠殺例を含め,雌雄とも視床下部あるいは視床に空胞変性が認められた.また,雌の回復試験では,投与を中止した後,前述の症状は消失し,回復期間終了時解剖例の脳の絶対重量が減少したが,組織学検査では異常所見がなかったことから,雌では脳の所見は可逆的変化であることが確認された.後述するように,l-ブロモ-3-クロロプロパン投与により,血漿中の臭素イオン濃度が上昇していると考えられ,いわゆるブロム中毒の可能性があるが,一般に臭化物は大脳皮質の機能を鎮静化するとされており,今回みられた痙攣を伴う症状の報告はみあたらない.また,大西ら1)は,l-ブロモ-3-クロロプロパンと同様なハロゲン化プロパンの一種である1-ブロモプロパンの吸入曝露により失調性歩行と小脳プルキンエ細胞の変性を生じることを明らかにしているが,その症状と組織学変化は,今回の試験結果と一致しなかった.

肝臓に関する所見としては,100 mg/kg以上の投与群で雌雄とも肝臓重量が増加し,小葉中心性の肝細胞肥大が観察された.血液生化学検査所見としては,500 mg/kg投与群の雌でアルブミン濃度が増加し,γ-GTP活性の上昇がみられたが,いずれも変化としては,軽度なものであった.また,雌の回復試験では,肝臓の相対重量の増加はみられたが,投与期間終了時にみられた他の変化は認められなかった.これらの所見の成因および関連性については,本試験では明らかにすることはできなかったが,l-ブロモ-3-クロロプロパン投与により肝臓への影響があるものと考えられる.

精巣に関する所見としては,100 mg/kg以上の投与群で精細管の萎縮があり,500 mg/kg投与群では,精巣上体管腔内の細胞残屑と精子数の減少が認められる例があった.l-ブロモ-3-クロロプロパンのサルモネラ菌にS9 Mixを加えた代謝活性化法の変異原性試験は陽性であり2),また,ハロゲン化プロパンは,ラットの精巣にDNA障害に起因する変化を起こすことが知られている3)ことから,本試験でみられた精巣および精巣上体の所見も,被験物質投与に起因する変化と考えられる.

血液学検査所見としては,投与期間終了時では,100 mg/kg投与群の雄にヘマトクリット値の減少と平均赤血球血色素濃度の上昇が認められた.また,雌では投与期間終了時には血液学検査所見に変化はなかったが,回復期間終了時の検査では,赤血球数,血色素量およびヘマトクリット値の減少が認められた.これらの変化に関連して,500 mg/kg投与群の脾臓ではヘモジデリン沈着の増強がみられたが,骨髄には変化は認められなかった.ハロゲン化プロパンの一種である1,2-ジクロロプロパン投与により,血中グルタチオンが低下し,溶血が生じることが報告されており4),今回投与期間終了時の100 mg/kg投与群の雄および回復期間終了時の雌でみられた貧血所見もl-ブロモ-3-クロロプロパン投与による溶血が主な成因と考えられる.

この他,血漿中の塩素濃度測定値が用量に依存して上昇し,雄では20 mg/kg以上,雌では100 mg/kg以上の用量で有意差が認められ,500 mg/kg投与群では,150 mEq/Lを超える個体もあった.関連する所見としては,500 mg/kg投与群の雌では,カリウム濃度の上昇がみられ,また,同群では,雌雄とも投与第4週に検査した尿のpHは低い傾向にあった.塩素濃度の測定には,イオン電極法を用いたが,この方法は臭素イオン等により影響を受けることが知られている5)ことから,塩素濃度の高い値を示した例の血漿について,イオンクロマトグラフ法により各陰イオン濃度の確認をした.その結果,多量の臭素イオンが検出され,本試験で認められた血漿中塩素濃度測定値の上昇には臭素イオンが影響したものと判断した.したがって,l-ブロモ-3-クロロプロパン投与により血中の臭素イオンが増加し,高用量群では臭素イオンの排泄にともなって水素イオンの排泄が増して尿のpHが低い値を示したものと考えられる.

死亡例および切迫屠殺例を主に,前胃粘膜の過形成,前胃あるいは腺胃粘膜のびらん,胃粘膜固有層の好中球の浸潤などの所見が認められた.これらは高用量群を中心に投与後の流涎が顕著であったことから,投与検体の刺激性に起因した変化と考えられる.

その他,500 mg/kg投与群では,雄において投与第15日以降の体重に減少あるいは増加抑制がみられ,雌雄とも投与第1日から2日の摂餌量が低値であった.これらの変化は,前述の一般状態の症状に関連した変化と考えられる.なお,500 mg/kg投与群の雌において,投与第3週の摂餌量が高値を示したが,体重に増加傾向もみられないことから餌こぼし量の増加による可能性がある.また,500 mg/kg投与群の雌では腎臓および心臓重量に,100 mg/kg投与群の雄では腎臓重量に,それぞれ増加がみられたが,いずれも組織学検査では関連する変化が認められず,これらの器官の重量増加の成因は,本試験では明らかにすることはできなかった.

以上のように,l-ブロモ-3-クロロプロパンの反復投与により,500 mg/kgの用量では,脳の視床下部,視床に空胞変性がみられ,雄では痙攣等の神経症状を示した後に死亡した.また,100 mg/kg以上の用量では,雌雄とも肝臓の小葉中心性の肝細胞肥大がみられ,雄では精細管の萎縮が認められた.この他貧血所見がみられ,脾臓のヘモジデリン沈着が増強した.これらのことから,本試験条件下におけるl-ブロモ-3-クロロプロパンの無影響量は,雌雄とも20 mg/kg/dayであると考えられる.

文献

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連絡先
試験責任者:畔上二郎
試験担当者:松岡千明,加藤博康,関 剛幸,新藤智子,永田伴子,吉村愼介,堀内伸二,稲田浩子,三枝克彦,安生孝子
(財)食品薬品安全センター 秦野研究所
〒257-8523 神奈川県秦野市落合729-5
Tel 0463-82-4751Fax 0463-82-9627

Correspondence
Authors:Jiro Azegami(Study Director)
Chiaki Matsuoka, Hiroyasu Katoh, Takayuki Seki, Tomoko Shindo, Tomoko Nagata, Shinsuke Yoshimura, Shinji Horiuchi, Hiroko Inada, Katsuhiko Saegusa, Takako Anjo
Hatano Research Institute, Food and Drug Safety Center
729-5 Ochiai, Hadano-shi, Kanagawa, 257-8523, Japan
Tel +81-463-82-4751Fax +81-463-82-9627